Toll样受体在载脂蛋白E敲除小鼠狼疮样自身免疫反应介导动脉粥样硬化机制中的系列研究-内科学(心血管)专业论文.docx

万方数据 万方数据 1.4 实验器材设备与试剂76 1.5组织处理 79 血清IgG、ANA与抗ds-DNA抗体的检测 80 脾组织蛋白TLR4通路分子以及Bax的 Western blot 检测 80 1.8肾小球面积、免疫复合物与巨噬细胞检测（HE染色、免疫组化与免疫 荧光方法） 81 1.9主动脉硬化斑块程度的检测（油红O）、C3、巨噬细胞与TLR4免疫组 化 83 1.10 统计学分析83 2 结 果84 2.1 第一部分84 2.1.1TLR4 配体 LPS 对小鼠活动、死亡率以及体重的影响 84 2.1.2 TLR4 配体 LPS 对自身免疫反应的影响 85 2.1.3 TLR4 配体对脾组织 Bax 表达的影响 89 2.1.4TLR4 配体对脾组织蛋白TLR4及其下游通路分子表达的影响 89 2.1.5 TLR4 配体 LPS 对 ApoE-/-小鼠 AS 程度、主动脉斑块内 C3 与巨噬细 胞的影响 91 2.2 第二部分93 2.2.1 小鼠活动、死亡率以及体重的影响93 2.2.2小鼠自身免疫的变化 94 2.2.3 脾组织蛋白 TLR4 信号通路分子以及 Bax 的表达 99 2.2.4 主动脉 AS 程度以及 AS 斑块内 TLR4 的表达 100 3 讨 论102 3.1TLR4 配体持续腹腔注射对脾组织 TLR4 信号通路以及 Bax 的影响.102 3.2 TLR4 配体与抗体水平以及器官损害的关系 105 3.3 TLR4 配体对小鼠一般情况的影响 105 5 3.4 TLR4 配体对雌性 ApoE-/-小鼠自身免疫特殊调节作用的可能因素..106 3.5 TLR4 配体 LPS 对 AS 的影响 106 3.6 TLR4 配体 LPS 对动脉斑块内 TLR4 表达水平的影响 106 3.7 TLR4、自身免疫反应以及 AS 的可能关系 106 3.8 本研究的创新点和限制性107 4 结 论107 5 参考文献108 6 致 谢117 附：综 述118 6 中文摘要一 载脂蛋白 E 敲除小鼠的狼疮样自身免疫及其与动脉粥样硬化的相关性研究 背景与目的: 博士研究生 王月海 博士生导师 黄子扬 教授 林 玲 教授 动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）是动脉血管壁的慢性炎症疾病，其 本质是血管内膜对炎症损伤的一种修复性反应，血管内皮细胞、平滑肌细胞以及 炎性细胞通过化学因子、细胞因子和生长因子互相作用、互相促进，构成复杂的 网络。近几年来，Toll样受体（toll-like receptor, TLR）在动脉粥样硬化中 的作用倍受关注，研究表明：AS炎症斑块中有TLR1、TLR2、TLR4表达，以TLR4 为主。大量资料提示TLR 在AS的免疫反应及慢性炎症中起重要的桥梁作用。 有研究提示自身免疫反应在 AS 的发病机制中发挥重要作用。系统性红斑狼 疮（Systemic lupus erythematosus，SLE）是一种典型的自身免疫性疾病，它 可独立于传统的心血管疾病危险因素而导致AS的形成。目前通常把SLE患者发病 至形成AS的过程分为五个阶段，即：（1）易感性；（2）固有和获得性免疫反应异 常；（3）自身抗体及免疫复合物的形成；（4）临床疾病期；（5）慢性炎症及慢性 免疫损伤。TLR在SLE疾病过程的第二阶段发挥重要作用：持续异常的抗原表达通 过TLR参与活化先天免疫细胞（DC）和获得性免疫细胞（B淋巴细胞），活化的细 胞随之激活T淋巴细胞，当抗原提呈细胞（APC）将自身抗原呈递给T和B淋巴细胞 时获得性免疫系统同时发挥作用，其后B淋巴细胞成熟为浆细胞并分泌自身抗体。 载脂蛋白E敲除（apolipoprotein E knockout，ApoE-/-）小鼠是一种动脉粥样硬 化的模型，表现了高脂血症与动脉粥样硬化，已经被广泛的应用于心血管研究领 域。既往研究显示ApoE-/-小鼠也存在着异常的免疫反应，ApoE-/-可以导致小鼠血 7 清中的IgG、抗染色质抗体、抗ox-LDL抗体以及抗心磷脂抗体水平升高。但是 ApoE-/-小鼠自身免疫反应的归属、机制以及与AS的关系有待进一步明确。TLR是 固有免疫的重要组成部分，是固有免疫与体液免疫的桥梁，它与自身免疫反应以 及AS的发病皆有一定的关系。本研究的目的在于探讨ApoE-/-小鼠是否存在狼疮样 自身免疫反应，并初步探讨其与动脉粥样硬化的可能相关性以及观察TLR在 ApoE-/-小鼠脾组织中的表达特点。 方法： 本研究包括 C57BL/6、Fas 基因敲除（Fas-/-）以及载脂蛋白 E 基因敲除（ApoE-/-） 三种小鼠，后两者皆以 C57BL/6 为背景。Fas-/-小鼠是一种狼疮小鼠，ApoE-/-