UHRF1在骨肉瘤细胞侵袭过程中的作用及其机制研究-外科学专业论文.docx

参考文献 88 综 述 90 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果 103 致 谢 104 个人简介 106 山西 山西医科大学博士学位论文 I I 第一部分UHRF1 在骨肉瘤细胞的侵袭过程中的作用及 其机制 中文摘要 骨肉瘤作为最常见的原发于骨组织的恶性肿瘤,在儿童和青少年的肿瘤中 较为常见,通常具有恶性程度高,易复发和转移,预后差的特征。尽管随着肿瘤切 除术、生物治疗和新辅助化疗技术的联合应用,骨肉瘤的治愈率在近年来是有所 提高的,但在骨肉瘤患者中出现肺转移的病人，总体生存率仍低于 50%。因此新 型的分子生物学治疗成为未来治疗骨肉瘤的必然选择方向。 UHRF1 是一个具有多个结构域的核蛋白，其生理作用可以促进细胞增殖和 促进细胞凋亡，在保持 DNA 的甲基化状态及表观修饰的遗传起着重要作用。近 年来发现在多种恶性肿瘤细胞中异常高表达，且密切地参与了肿瘤的发生、侵 袭、转移及放化疗敏感性抵抗，由此可能成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。但 是 UHRF1 在骨肉瘤细胞中的作用并不明了，在本实验中，我们研究 UHRF1 在 骨肉瘤细胞中侵袭过程中的作用，及其相关作用机制。 目的： 1.研究 UHRF1 在骨肉瘤细胞的侵袭过程中的所发挥的作用 2.研究 UHRF1 在骨肉瘤细胞的侵袭过程中的作用机制 方法： 1.检测 UHRF1 在骨肉瘤细胞系 MG-63, Saos-2, U2OS 和 HOS 中的表达水 平，然后利用 CCK-8 增殖实验来检测过表达 UHRF1 对骨肉瘤细胞系增殖能力 的影响。 II II 2.利用 Transwell 侵袭实验检测 UHRF1 对骨肉瘤细胞 MG-63, Saos-2, U2OS 和 HOS 侵袭能力的作用 Western blot 检测骨肉瘤细胞中 Rb1 基因的表达水平，然后采用慢病毒感 染干扰 Rb1 基因阳性细胞中的 Rb1 基因表达，检测 UHRF1 对其侵袭能力的影响。 Western blot 检测过表达 UHRF1 对骨肉瘤细胞对 Rb1 和 E-Cadherin 的作 用。 5.检测 UHRF1 在骨肉瘤细胞上皮细胞向间叶细胞的转化中的作用。 结果： 1.骨肉瘤细胞 MG-63, Saos-2, U2OS 和 HOS 均有 UHRF1 表达，而且过表 达 UHRF1 促进了骨肉瘤细胞的增殖。 2.UHRF1 增加了 Rb1 基因阳性的 MG-63 的侵袭能力，而对于无 Rb1 基因 的 Saos-2 则无明显作用。 3.干扰 Rb1 基因阳性细胞中的 Rb1 基因后，发现过表达 UHRF1 对其侵袭 能力失去调控作用。 4.UHRF1 通过抑制 Rb1 基因来抑制 E-Cadherin 5.UHRF1 促进了 Rb1 表达阳性细胞的上皮细胞向间叶细胞的转化。 结论： 1. UHRF1 促进了骨肉瘤细胞的增殖能力并增加了骨肉瘤细胞的侵袭能力, 促进了上皮细胞向间叶细胞的转化。 2. UHRF1 增加了骨肉瘤细胞的侵袭能力是依赖 Rb1 表达状态的。 3. UHRF1 通过抑制 Rb1 基因表达，进而下调 E-Cadherin 的表达，从而增 加了骨肉瘤细胞的侵袭能力，促进了上皮细胞向间叶细胞的转化 关键词：UHRF1；骨肉瘤细胞；Rb1；E-Cadherin；上皮细胞向间叶细胞转化 PAGE PAGE III 第二部分 CXCL12 在诱导骨肉瘤耐药过程中的作用及其机 制 中文摘要 在以往的研究中，MTX 和 docetaxel 被证实对骨肉瘤的治疗有很有意义的作 用。而对化疗耐药，是影响化疗疗效的主要屏障。与普通耐药的形成机制不同， 药物压力性诱导有着不一样的形成机制。我们在此研究中应用基因芯片技术高 通量地筛选 U2OS 和 MG63 耐药细胞细胞株与亲本细胞株之间的公共差异基因 表达.明确其发挥的主要调控作用及其下游通路，进一步了解骨肉瘤耐药的可能 机制，为骨肉瘤多药耐药的逆转寻找新的靶点。 目的： .探讨 CXCL12 在 MTX 和 docetaxel 诱导性骨肉瘤耐药中的作用 .探讨 CXCL12 在 MTX 和 docetaxel 诱导性骨肉瘤耐药中的作用机制。 方法： 1. 对 MTX 和 docetaxel 诱导性骨肉瘤耐药细胞株进行体外连续培养； 2.基因芯片检测基因表达变化； 3.检测其公共差异基因下游凋亡途径。 结果： 1.耐药细胞构建成功； 2.基因检测提示 CXCL12 为唯一非 passager 基因； 3.凋亡途径检测提示 Bcl-xl 的表达被下调。 结论 ： PAGE PAGE IV CXCL12 是 MTX 和 docetaxel 诱导性骨肉瘤耐药的主动调控因子。 CXCL12 通过下调 Bcl-xl