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泰半夏小块茎诱导及工厂化育苗研究 　　摘要：以泰半夏的无菌叶片、叶柄为材料，通过愈伤组织分化不定芽途径，建立泰半夏工厂化育苗植株再生体系。结果表明，以叶片、叶柄为外植体，愈伤组织最适诱导培养基分别为：MS2，4-D 05 mg/L6-BA 30 mg/L、MS05 mg/L 2，4-D20 mg/L 6-BA ；愈伤组织在相同培养基中增殖后诱导小块茎分化的最适培养基为：MS2 mg/L 6-BA。/2MS0%活性炭05 mg/L NAA培养基产生的根较粗壮、浓密。 　　关键词：泰半夏；块茎诱导；育苗 　　中图分类号：S567239043文献标志码： A 　　文章编号：002-302（204）2-0067-03 　　半夏（inellia ternate）别称野芋头，为天南星科多年生草本植物，以其干燥块茎入药，性温、味辛、有毒，具有降逆止呕、消痞散结等功能，是我国传统中药材。生长于江苏省泰州地区的半夏被称为泰半夏，具有个大、质坚实、色白、粉性足等优良性状，是当地著名的道地药材。泰半夏多产于旱作的高沙土农田中，以野生状态生存。随着种植制度的改革、旱改水面积的扩大，以及化肥、农药、除草剂的广泛使用，泰半夏野生资源已处于濒危状态，不能满足用药需求。人工栽培半夏用种量较大，加上生产退化等问题均导致半夏供应长期处于紧缺状态。因此，研究新的繁殖技术对于保护泰半夏道地药材种质资源有着积极意义。目前，泰州地区通常采用半夏块茎或珠芽进行繁殖，但因存在繁殖能力低及品种退化等问题而限制了泰半夏产量、质量的提高。半夏分布范围较广，近年来湖北省荆门市、甘肃省西河县、贵州省、云南省、湖南省、四川省、安徽省等地都陆续展开了保护当地道地半夏药材资源的组培研究，以块茎、叶片、叶柄或珠芽等为外植体，得到半夏的再生植株[2-]。本试验以从块茎为外植体获得的泰半夏无菌苗为材料，建立适宜工厂化生产的再生体系，以期保护泰州半夏种质资源，为泰半夏的工厂化育苗及规模种植奠定基础。 　　材料与方法 　　材料 　　试验材料为泰半夏组培苗，野生半夏块茎外植体采自江苏省泰兴市。选择生长旺盛、无病虫害的健壮植株的块茎，用自来水洗净，流水冲洗30 min以上。用75%乙醇充分浸没30 s，无菌水冲洗后再用0%HgCl2溶液充分浸泡0～6 min，无菌水反复漂洗6～8次。将块茎切成05～08 cm的小块，接种于诱导培养基上，形成无菌苗。 　　2方法 　　2外植体的处理 　　以半夏组培苗叶片及叶柄为外植体，无菌条件下，剪取生长一致的无菌苗顶部完全展开的幼嫩叶片，切成～2 cm的小块，近轴面朝下接种于诱导培养基中；从生长良好的无菌苗上剪取叶柄接种于诱导培养基中。 　　22基本培养基及培养条件 　　愈伤组织的诱导及不定芽分化培养基以改良MS为基本培养基，附加30 g/L蔗糖及 7 g/L 琼脂，pH 值为58。块茎启动培养基为MS附加 02 mg/L NAA、2 mg/L 6-BA。生根培养以/2MS为基本培养基，附加5 g/L蔗糖、7 g/L琼脂、05 g/L活性炭，pH 值为58，2 ℃高压灭菌5 min。愈伤组织诱导、分化及不定芽生根培养均在以下环境中进行：培养温度（25±2） ℃，光照时间4 h/d，光照强度2 000～2 500 lx。 　　23激素处理 　　将无菌叶柄、叶片分别接种于不同生长调节物质组合的培养基中，采用完全随机设计。每处理6瓶，每瓶接种5个外植体，培养室培养。定期观察小块茎诱导及生长情况，2 d后统计愈伤组织诱导率。诱导率计算公式如下： 　　诱导率=诱导产生愈伤组织的外植体数/接种外植体总数×00%。 　　将诱导产生的愈伤组织切成03～05 cm的小块，接种至不定芽诱导增殖培养基上，培养25 d后统计小块茎平均诱导数量。 　　24生根与壮苗 　　待丛生芽苗长至3～4 cm时，将其分株转移到不同生根培养基中，接种2 d后观察并记录不同处理对植株生根的影响。每处理6瓶，每瓶5株试管苗。 　　25炼苗与移栽 　　待根长至～2 cm时炼苗移栽。移栽基质设4种：A：园土；B：珍珠岩 ∶[KG-3]泥炭 ∶[KG-3]沙= ∶[KG-3]2 ∶[KG-3]2；C：育苗基质；D：育苗基质 ∶[KG-3]园土= ∶[KG-3]。 　　2结果与分析 　　2不同激素对泰半夏愈伤组织诱导的影响 　　将无菌叶片、叶柄接入不同激素配比的培养基中，诱导结果见表。在诱导愈伤过程中，诱导启动时间差距较小。叶片外植体接种5～7 d，叶片边缘翘起，4 d时愈伤组织启动明显，具叶脉的切口处是最易诱导的部位。叶片外植体诱导出淡黄色的愈伤组织，质地坚实。诱导效果随2，4-D浓度的升高而增强，当2，4-D浓度达0 mg/L时，叶片外植体诱导率较高。在一定范围内，叶