“Cocktail”探针药物法评价辣椒素对大鼠CYP450亚型的影响-药剂学专业论文.docxVIP

华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 1 PAGE 1 摘 要 评价辣椒素在体内外对大鼠 CYP450 亚型 CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1 和 CYP3A4 的诱导或抑制作用，为临床评估和正确处理辛辣食物与药物间相互作用提供 依据。 本文采用“Cocktail”探针药物法，研究辣椒素对大鼠 CYP450 亚型 CYP1A2、 CYP2C11、CYP2E1 和 CYP3A4 活性的影响，分为体外试验和体内试验两部分。体外 试验中采用非那西丁、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和睾酮分别作为 CYP1A2 、CYP2C11 、 CYP2E1 和 CYP3A4 的探针药物，并建立同时测定肝微粒体中探针药物及其代谢产物 含量的 HPLC 分析方法。以固相萃取法提取待测物。采用 C18 色谱柱和梯度洗脱进行 色谱分离，八种待测物在各自线性范围内线性关系良好（r≥0.9992），低、中、高三种 浓度的日内、日间精密度≤10.44 %，平均相对回收率均在 86.15%~105.56% 之间，平 均提取回收率均在 79.86%~88.62% 之间。结果表明该方法快速、准确，可用于肝微 粒中探针药物非那西丁、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、睾酮及其代谢产物的含量测定。 体外孵育试验分为试验组和对照组，试验组采用大鼠肝微粒体孵育体系、探针药 物和辣椒素（对照组仅加入缓冲液）共同孵育 20 min，反应终止后用上述 HPLC 方法 检测代谢产物的生成量以代表酶的活性，以对照组酶活性为 100%，计算试验组四种 亚型相对活性百分比。结果表明 CYP450 四种亚型的相对活性百分比随辣椒素浓度增 加而逐渐降低。采用 Graphpad prism 5.0 计算辣椒素对各亚型的 IC50 值，评价辣椒素 在体外对四种亚型的抑制作用。结果显示辣椒素对大鼠肝微粒体 CYP1A2 、 CYP2C11、CYP2E1 和 CYP3A4 的 IC50 值分别为 36.21、17.19、51.64 和 18.86 μmol?L-1， 表明辣椒素在体外可抑制大鼠肝微粒体 CYP1A2 、CYP2C11 和 CYP3A4 的活性，对 CYP2E1 的抑制作用较弱。将辣椒素与大鼠肝微粒体分别预孵育 0、5、10、15、20、 30 min，以预孵育 0 min 时的酶活性为 100%，计算不同预孵育时间下各亚型的相对活 性百分比，考察辣椒素对 CYP450 是否为机理性抑制作用。结果发现辣椒素对 CYP450 未呈现预孵育时间依赖性的抑制作用。 依据体外实验结果，体内试验中选择 CYP1A2、CYP2C11 和 CYP3A4 三种亚型， 分别采用咖啡因、甲苯磺丁脲和氨苯砜作为探针药物，建立同时测定血浆中三种探针 药物含量的 HPLC 方法。以液液萃取法提取待测物。采用 C18 色谱柱和梯度洗脱进行 色谱分离，三种待测物在各自线性范围内线性关系良好（r≥0.9960），低、中、高三种 浓度日内、日间精密度≤11.54%，平均相对回收率均在 92.84%~108.93% 之间，平均 提取回收率均在 67.59%~84.79% 之间。结果表明该方法快速、准确，可用于血浆样 品中探针药物咖啡因、甲苯磺丁脲和氨苯砜的含量测定。 体内试验采用 SD 雄性大鼠，分为试验组和对照组，试验组每日清晨按 25 mg?kg-1 的剂量灌胃给予辣椒素溶液；空白组每日清晨按 2 mL?kg-1 的剂量给予空白溶剂，均 连续给药 7 天。给药期间对大鼠进行正常喂养。第 7 天晨灌胃后 30 min，腹腔注射 “Cocktail”探针药物，均按照 10 mg?kg-1 的剂量给药。于给药后 0.17、0.5、1、1.5、 2、3、4、6、9、12、24 h 断尾采血，以上述 HPLC 法测定血药浓度。经 DAS 2.1.1 计算探针药物的药代动力学参数，通过对比试验组和对照组的药动学参数，评价辣椒 素在体内对大鼠 CYP1A2 、CYP2C11 和 CYP3A4 的影响。结果表明辣椒素可显著缩 短咖啡因的 T1/2，降低 AUC0-t 和 AUC0-∞，显著增加其 CL，对 Cmax 和 Tmax 无显著影响； 可显著降低甲苯磺丁脲的 AUC0-t 和 AUC0-∞，显著增加其 CL，对 T1/2、Cmax 和 Tmax 无 显著影响；可显著降低氨苯砜的 AUC0-t 和 AUC0-∞，显著增加其 CL，对 T1/2、Cmax 和 Tmax 无显著影响。 综合上述试验结果，辣椒素在体外对大鼠肝微粒 CYP1A2 、CYP2C11 和 CYP3A4 具有一定的抑制作用，对 CYP2E1 的抑制作用很弱。辣椒素在体内对大鼠 CYP1A2、 CYP2C11 和 CYP3A4 均有显著的