中药穿山龙干预哮喘豚鼠fas bcl-2凋亡基因表达的实验研究-experimental study on the effect of traditional chinese medicine chuanshanlong on fas bcl - 2 apoptosis gene expression in asthmatic guinea pigs.docxVIP

万方数据 目 录 中文摘要……………………………………………………………………………Ⅰ ABSTRACT…………………………………………………………………………II 前 言………………………………………………………………………………1 一、材料与方法……………………………………………………………………2 (一)实验材料…………………………………………………………………2 1.实验动物……………………………………………………………………2 2.实验试剂……………………………………………………………………2 3.主要试剂配方………………………………………………………………3 4.实验药物……………………………………………………………………3 5.主要仪器……………………………………………………………………3 (二)实验方法…………………………………………………………………4 1.动物分组……………………………………………………………………4 2.哮喘模型制作………………………………………………………………4 3.给药方法……………………………………………………………………4 4.标本采集……………………………………………………………………4 5.指标观察……………………………………………………………………5 6.统计方法……………………………………………………………………11 二、结果……………………………………………………………………………12 (一)豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数和 Eos 计数……… 12 (二)肺组织中 Eos 的 HE 染色和 Giemsa 染色结果及病理形态学观察……12 (三)肺组织中嗜酸粒细胞 Bcl-2 免疫组化结果…………………………… 13 (四)RT-PCR 检测豚鼠肺组织 fas 及 bcl-2 mRNA 的表达………………… 13 (五)血清中 GM-CSF 及 TNF-α 水平…………………………………………14 三、分析与讨论…………………………………………………………………… 15 四、小结…………………………………………………………………………… 19 五、结论………………………………………………………………………???… 20 参考文献…………………………………………………………………………… 20 附图………………………………………………………………………………… 22 致谢………………………………………………………………………………… 25 文献综述…………………………………………………………………………… 26 中药穿山龙干预哮喘豚鼠 fas、bcl-2 凋亡基因表达的实验研究 中文摘要 目的 通过观察中药穿山龙对哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞（Eos）的影响，对 其体内炎性因子粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平，以 及对凋亡促进基因 fas 与凋亡抑制基因 bcl-2 mRNA 及其蛋白表达的影响，研究 中药穿山龙在拮抗哮喘气道炎症方面的作用，以探讨其治疗哮喘的可能机制。 方法 采用经典的卵白蛋白注射与雾化吸入致敏激发法建立哮喘豚鼠模型。将 50 只符合实验标准的豚鼠随机分为 5 组，每组 10 只，即正常组、模型组、醋酸 泼尼松组、穿山龙组及穿山龙+醋酸泼尼松组，镜下观察各组支气管肺泡灌洗液 （BALF）中 Eos 计数的变化及肺组织中 Eos 浸润等病理表现；免疫组化染色法检 测 Bcl-2 蛋白的表达；用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法（ELISA）测定豚鼠血 清中 GM-CSF、TNF-α细胞因子的含量；RT-PCR 法测定豚鼠体内的 fas 和 bcl-2 mRNA 水平。 结果 穿山龙各治疗组豚鼠 BALF 的 Eos 计数明显低于模型组；穿山龙各治疗 组豚鼠血清中细胞因子 GM-CSF、TNF-α浓度明显低于模型组,穿山龙各治疗组豚 鼠肺组织匀浆中 bcl-2 mRNA 浓度明显低于模型组, fas mRNA 浓度明显高于模型 组，穿山龙各治疗组 Eos Bcl-2 阳性细胞百分数明显低于模型组，经过统计学处 理，与模型组比较，有显著性差异(P0.01 或 P0.05)；而穿山龙+醋酸泼尼松组 与醋酸泼尼松组比较，上述结果均无显著性差异(P0.05)；穿山龙各治疗组可改 善或明显改善哮喘豚鼠气道粘膜及粘膜下层的炎性细胞浸润。 结论 1.穿山龙可明显减少哮喘豚鼠肺组织 Eos 浸润，减轻哮喘气道炎症。 2.穿山龙可诱导促进凋亡基因 fas 及减少 bcl-2mRNA 的表达，减少嗜酸粒细胞 的 Bcl-2 蛋白表达，促使 Eos 凋亡。3.穿山龙可明显减低细胞因子 GM-CSF、TNF-α 的含量，减轻哮喘气道炎症。4