松乳菇子实体多糖提取工艺及其组分研究.docVIP

松乳菇子实体多糖提取工艺及其组分研究 　　以多糖得率为指标，对松乳菇子实体预处理方式、乙醇沉淀浓度和提取次数进行比较，并选择对松乳菇多糖提取影响较大的三个因素（时间、料水比、温度）设计正交试验优化多糖提取条件，结果表明，松乳菇子实体粗多糖提取较好的条件是：干燥子实体粉碎后过40目筛，乙醇沉淀浓度为80%；提取2次可得到7.42%的粗多糖；正交试验表明，提取时间2.5 h，料水比1∶25(w/v)，温度85 ℃为松乳菇多糖提取的最佳组合。用纸层析法分析松乳菇多糖，表明其含有葡萄糖、果糖、半乳糖和甘露糖等单糖。?? 　　松乳菇； 子实体； 提取条件； 多糖组分?? 　　S646.19??A 　　 　　松乳菇（Lactarius deliciosus）是一种菌根性真菌，其子实体肉质细嫩，味道鲜美，营养丰富，不仅可食用，也可药用。真菌多糖具有抗癌、提高免疫力和抑菌等多方面的作用［1］。据报道松乳菇多糖提取物对肉瘤??180和艾氏腹水癌有抑制作用，该菌产生的乳菇紫素可起抗菌作用［2］。然而，关于松乳菇子实体多糖提取工艺和多糖分子量及单糖组成方面的研究较少；同时由于松乳菇是一种慢生菌种，生长周期较长，多糖产量较低，不利于工业化生产。因此本文对松乳菇的多糖提取工艺进行摸索，为松乳菇多糖的研究和开发奠定基础。?? 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1?Σ牧? 　　新鲜无病虫害松乳菇子实体采于湖南桑植县松树林。?? 　　1.2?κ匝榉椒? 　　1.2.1?Χ嗵翘崛? 　　取松乳菇子实体清洗，在60 ℃烘干后粉碎，加入水提取，离心，取上清液；加含量为5%的TCA沉淀蛋白质，用浓度为3%的H2O2去色素至浅黄色上清液［3］，加4倍体积无水乙醇沉淀多糖，离心，取沉淀，用少量乙醚洗涤，40 ℃真空干燥，得白色粉末状的粗多糖，测定粗多糖含量，计算提取率［4］。粗多糖得率(%)=粗多糖质量/松乳菇质量 ×100%。?? 　　1.2.2?Χ嗵呛?量的测定 　　采用苯酚硫酸法［5］测定多糖含量。以葡萄糖为标准物质制作标准曲线，计算样品中的多糖含量。多糖含量＝（溶液中多糖浓度×溶液体积）/粗提物质量×100％。?? 　　1.2.3?ψ邮堤逶ご?理方式比较 　　将烘干经粉碎后过40目筛的粉末与剪碎至1 cm2左右的子实体碎片各10 g,料水比1∶25,90 ℃提取3 h，80%乙醇沉淀，比较不同的预处理对松乳菇多糖得率的影响。试验重复3次。?? 　　1.2.4?Σ煌?乙醇浓度对多糖提取的影响 　　称取10 g子实体干粉，料水比、温度、提取时间同1.2.3，分别选择30%、40%、50%、70%、80%和90%的乙醇沉淀多糖，比较乙醇浓度对松乳菇多糖含量和提取率的影响。试验重复3次。?? 　　1.2.5?μ崛〈问?比较 　　称取5 g子实体干粉，料水比、温度、提取时间和乙醇沉淀浓度同1.2.3，提取次数分别为1、2、3、4次，比较提取次数对多糖含量和提取率的影响。试验重复3次。?? 　　1.2.6?Χ嗵翘崛√跫?优化 　　松乳菇多糖提取工艺中时间、料水比和温度三个因子对多糖提取影响较大，根据单因子实验的结果，设计正交试验以优化松乳菇多糖的提取工艺。按L??9（34）设计三水平的正交试验，因素和水平见表1。?? 　　 　　1.2.7?Χ嗵亲榉址治? 　　①水解: 称取粗多糖10 mg，加入6 mL 1 mol/L硫酸溶液后于100 ℃封管水解5 h，水解液冷却后用饱和的Ba(OH)??2溶液中和，然后离心去除沉淀，上清液浓缩后备用。②纸层析: 层析滤纸12 cm ×25 cm，溶剂系统为正丁醇-吡啶-水(8∶4∶3)。分别将浓缩后的水解液及各种标准单糖用毛细管点样, 上行层析10 h。层析完后，于烘箱中烘干展层剂, 均匀喷洒苯胺-二苯胺-三氯乙酸显色剂, 然后置100 ℃ 烘10 min显色［6］。?? 　　 　　2 结果与分析 　　 　　2.1?υご?理方式对多糖得率的影响 　　据报道，食用菌中多糖主要存在于细胞壁，子实体在多糖提取以前需要进行预处理，而不同的预处理对多糖得率的影响不尽相同［7］。试验结果表明，剪碎和粉碎处理子实体多糖得率分别为4.06％和7.10％。?? 　　2.2?Σ煌?乙醇浓度对多糖提取率的影响 　　用乙醇沉淀多糖时，乙醇浓度对多糖的影响很大。一般情况下，多糖的分子量越大，被沉淀下来所需的乙醇浓度就越小［8］，试验结果见表2。 　　从表2可以看出乙醇浓度越高多糖得率越高，当加入30%的乙醇时能得到4.18%的多糖，而加入90%的乙醇时能得到7.50%的多糖；乙醇浓度大于70％时乙醇浓度增大对多糖得率的影响并不大，从降低生产成本的角度考虑，使用70%～80%的乙醇较为经济