枯草芽孢杆菌粉剂生产工艺研究.docVIP

枯草芽孢杆菌粉剂生产工艺研究 　　摘 要：芽孢因可以耐受高温应激可以用多种方法将发酵液制成粉剂，常用方法有喷雾干燥和冷冻干燥[1，2]，但是这常规先进方法设备投入较大。我们利用现有设备生产高质量的菌粉。基本生产流程为将发酵液离心，获得菌泥，菌泥与载体混合后烘干，最后粉碎制成成品。为了提高回收率，我们对每一步生产中的参数进行了设定并实验。经过实验，我们得出了最佳的生产工艺，具体参数为发酵液进入离心机的流量为400 L/h，排渣时间为6 min，载体与菌泥的混合比例为2∶1，烘干时干燥机的进风温度为70 ℃，烘3 h。 　　关键词：枯草芽孢杆菌；微生态制剂；粉剂；载体；回收率 　　由于抗生素的大量使用，随之出现的负面效应也日益突出，表现为病原微生物产生耐药性和药物在动物产品中残留，从而对人类的健康产生潜在的危害。因此，抗生素替代品益生菌、 酶制剂、 酸制剂等的研究与开发成为近年来绿色饲料添加剂的热点，其中益生菌备受关注。芽孢杆菌能够形成耐热、耐旱、抗紫外线的芽孢，是研制生防菌剂极好的材料[3-5]。在动物生产中的作用是畜牧业科研和生产人员所关注的焦点[6，7]。枯草芽孢杆菌能够形成芽孢，通过一定的方法制成固体制剂不仅可以减少产品体积，便于运输，更能够扩大产品的使用范围，给生产生活带来便利。通过不断的探索实验，我们已经将发酵液中芽孢的形成率控制在99%以上，发酵液中菌数控制在180亿cfu/mL以上，但是怎样能够最大限度的将菌液分离，使芽孢最大限度的转移到固体中，我们进行了一系列的研究。 　　1 材料及方法 　　1.1 菌种 　　枯草芽孢杆菌来自于中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC 20872）。 　　1.2 实验及发酵设备 　　发酵罐（浙江双子机械制造有限公司）；DHC310蝶片式自动排渣分离机（辽阳阳光制药机械有限公司）；槽型混合机（广州市海缔机械科技有限公司）；FG-200高效沸腾干燥机（常州恒城富士特干燥设备有限公司）；WF万能粉碎机（南京神鹏机械设备有限公司）；YJ-875洁净工作台（吴江市佳运通空调净化设备有限公司）；HH-4数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）；YXQ.SG41.280手提式压力蒸汽消毒器（上海三申医疗器械有限公司）；实验所用的试剂均为分析纯。 　　1.3 实验方法 　　生产基本流程：枯草芽孢杆菌发酵液→蝶片式自动排渣分离机→菌泥与菌体载体按比例混匀→高效沸腾干燥机烘干→万能粉碎机粉碎。 　　1.3.1 蝶片式自动排渣分离机的参数设定 首先设定进入碟片式分离机的流速分别为200、400、600、800、1 000 L/h，通过平板计数法[8]测定上清液中菌数确定流速。待流速确定之后设定排渣时间分别为4、6、8、10、12 min，利用平板计数法测定上清液（废液）中残留的菌落数确定排渣时间。 　　1.3.2 菌泥与载体的比例确定 设定载体与菌泥的混合比例为1∶1，2∶1，3∶1，4∶1（重量比），烘干后测定回收率。烘干条件为50 ℃，直至烘干。回收率的计算方式为：首先将离心后的菌泥混合均匀，测定菌泥中单位菌落数（cfu/g），乘上重量就是菌泥的总菌数。然后按比例混合均匀，烘干后测定成品单位菌落数，乘上成品重量就是成品总的菌数。两者之比就是回收率。通过测定混合后水分[9]与烘干后活菌的回收率，确定最佳的混合比例，以确保在最短的时间内得到最高的活菌回收率[10]。 　　1.3.3 高效沸腾干燥机参数设定 热空气的进风温度直接影响着烘干时间和活菌回收率。设定进风温度在50、70、90、110 ℃，通过测定烘干后活菌的回收率，确定最佳的进风温度。活菌回收率的计算方法同1.3.2，具体公式如下： 　　活菌回收率计算公式（%）= 　　2 结果 　　2.1 蝶片式自动排渣分离机参数实验结果 　　从图1 可以看出进入离心机的流量在200 L/h时，上清液中残留的菌数为0.24亿cfu/mL，当进入离心机的流量在400 L/h时，上清液中残留的菌数为1.09亿 cfu/mL。虽然400 L/h离心时废液中残留的菌数很大，但是考虑占发酵液（发酵液为180亿cfu/mL）中菌数的比重、离心所需时间、工人成本以及耗电量等问题，最终确定流量为400 L/h。 　　从图2可以看到，在流速（400 L/h）恒定的前提下发酵液进入离心机，排渣时间为4 min时，废液中残留的菌数为0.09亿cfu/mL，当排渣时间为6 min时，上清液中残留的菌体为0.89亿cfu/mL。虽然排渣时间为4 min时，废液中菌体数量最少，但是分离出来的菌泥含水量很大，给后续混合，烘干带来很大的负担。排渣时间为6 min时，废液中有0.89亿cfu/mL的菌体，但是相比发酵液母液180亿cfu/mL的量来讲，其比