毛蕊花糖苷抑制脂多糖诱导BV―2小胶质细胞炎症反应及机制研究.docVIP

毛蕊花糖苷抑制脂多糖诱导BV―2小胶质细胞炎症反应及机制研究 　　[摘要] 探究毛蕊花糖苷（acteoside，ACT）对细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症反应的抑制作用及潜在机制。该实验以LPS诱导BV-2细胞作为炎症模型，将BV-2细胞分为正常对照组、模型组、给药组，ACT按指定浓度（12.5，25，50 μmol?L-1）作用于细胞。采用NO试剂盒检测NO炎症因子的释放量，ELISA法检测TNF-α和IL-6的表达量，Western blot法检测炎症相关蛋白（iNOS，COX-2，p-IKKβ，IKKβ，p-IκB，IκB）的表达。此外，通过检测细胞核/浆中NF-κB p65的表达以及借助免疫荧光技术，阐明ACT对炎症转录因子NF-κB p65核转位的作用。结果显示，ACT可显著降低LPS诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症，且呈剂量依赖性。具体表现在：显著降低炎症因子NO，IL-6和TNF-α的释放量，抑制炎症相关蛋白iNOS和COX-2的表达。同时，ACT可明显抑制NF-κB信号通路中关键蛋白IKKβ和IκB的磷酸化，且明显抑制NF-κB p65的细胞核转位。以上结果表明，毛蕊花糖苷可显著降低LPS诱导的小胶质细胞神经炎症反应，抑制炎症相关蛋白的表达，其潜在机制是通过抑制NF-κB信号通路实现的。 　　[关键词] 神经炎症；小胶质细胞；细菌脂多糖；毛蕊花糖苷；NF-κB通路 　　[Abstract] To investigate the inhibitory effects of acteoside （ACT） on BV-2 microglial cells and the potential mechanism，LPS was used to treat BV-2 cells with or without ACT （12.5，25，50 μmol?L-1）. Then， the expressions of inflammatory factors （NO，TNF-α，IL-6） and inflammation related proteins （iNOS，COX-2，p-IKKβ，IKKβ，p-ⅠκB，ⅠκB） were detected. In addition，the nuclear translocation of NF-κB was explored. The results showed that ACT could significantly suppress the inflammatory response against LPS stimulation by decreasing the expressions of NO，IL-6，TNF-α，iNOS，COX-2 and the phosphorylations of IKKβ and IκB. Moreover，the nuclear translocation of NF-κB p65 was inhibited by ACT. Taken together， ACT could significantly inhibit the inflammatory response of BV-2 microglial cells which were induced by LPS via inhibition of NF-κB signaling pathway. 　　[Key words] neuroinflammation；microglial cells；lipopolysaccharide；acteoside；NF-κB signal pathway 　　doi：10.4268/cjcm 　　阿尔兹海默症（Alzheimer′s disease，AD）是一种常见的多病因中枢神经系统退行性疾病，为老年人痴呆症的主要类型之一。已有研究表明，AD患者脑内存在大量炎症特性，如炎症细胞因子及趋化因子增加，损伤部位小胶质细胞过度激活而聚集等[1]。目前发现，可以过度激活小胶质细胞的因素非常多，如LPS[2]，炎症因子（TNF-α，IL-6等），淀粉样蛋白（Aβ）等，这些炎症信号可通过各种传导通路作用于脑部，进而激活小胶质细胞[3]。 　　毛蕊花糖苷（acteoside，ACT）是列当科肉苁蓉的主要活性成分之一，现代药理学研究发现，在以冈田酸诱导的阿尔茨海默病（AD）细胞模型中，ACT能够通过抑制tau蛋白过度磷酸化来发挥神经保护作用[4]。还可能通过抑制小鼠脑皮层组织中caspase-3基因表达，维持皮层组织神经细胞的正常形态及数量，实现对小鼠脑损伤的保护