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桦剥管孔菌液体发酵环境条件研究 　　摘要：以发酵液的多糖含量为考核指标，通过单因素试验和正交试验，对桦剥管孔菌（??Piptoporus betulinus??）液体发酵的接种量、培养基装量及培养基初始pH进行优化。结果表明,优化的桦剥管孔菌培养条件为：接种量2.5%、500 mL三角瓶装200 mL液体发酵培养基、培养基初始pH自然条件下,发酵6 d时，发酵液中多糖含量最高（28.75%）。?? 　　关键词：桦剥管孔菌； 液体培养； 培养基装量； 接种量； 培养基初始pH 　　 　　 　　桦剥管孔菌（??Piptoporus betulinus??）又称桦孔菌、桦滴孔菌、桦多孔菌［１］,是一种世界性分布的能造成桦树（birch）心材褐色腐朽的病原菌,在我国主要分布于四川、云南、河南、陕西、甘肃、内蒙古、黑龙江、西藏等地区。桦剥管孔菌也是一种药食兼用的珍稀大型真菌，含有丰富的营养物质和生物活性物质，民间可用于防治肿瘤、抗病毒和提高机体免疫力, 具有广阔的开发和应用前景［２］。?? 　　桦剥管孔菌发酵液多糖具有抗肿瘤、抗病毒和提高机体免疫力等多种保健功能［3］。但目前国内外研究桦剥管孔菌液体培养条件的报道较少［4］。?? 　　本试验针对桦剥管孔菌液体培养的3个主要环境因素――接种量、培养基装量及培养基初始pH进行优化，为工业化生产桦剥管孔菌多糖提供参考。?? 　　1 材料与方法 　　1.1??供试菌株 　　 桦剥管孔菌(??P. betulinus??)菌株467由山东省应用真菌重点试验室提供。?? 　　1.2??供试培养基 　　 平板培养基：20% 马铃薯，2% 蔗糖，1% 麸皮，0.5% 蛋白胨，0.1% ??KH????2??PO????4????，??0.05%?? MgSO????4??，2%琼脂，pH自然。?? 　　液体种子培养基：平板培养基不加琼脂。?? 　　液体发酵培养基：2% 乳糖，0.5% 蛋白胨，0.1% KH????2??PO????4??，0.05% MgSO????4??，pH自然。?? 　　1.3?Ψ椒? 　　1.3.1?σ禾逯肿拥闹票? 　　 5块直径8 mm的活化菌种接入装有??200 mL??液体种子培养基的500 mL三角瓶中，150 r/min、27 ℃培养，直至发酵液不再浑浊，菌球密度适中，得液体种子。?? 　　1.3.2?Φヒ蛩厥匝? 　　1.3.2.1 接种量的筛选?? 　　装有200 mL液体发酵培养基500 mL三角瓶按2.5%、5.0%、7.5% 和10.0% 比例接种液体种子，150 r/min、27 ℃ 培养4 d得发酵液，采用蒽酮-硫酸比色法测定发酵液总糖含量［5］，采用3，5-二硝基水杨酸比色法测定发酵液还原糖含量［6］。每个处理3个重复。?? 　　多糖含量=总糖含量－还原糖含量?? 　　1.3.2.2 培养基装量的筛选?? 　　500 mL三角瓶装液体发酵培养基125、150、175、200和225 mL，接种量为5.0%，培养6 d得发酵液,其它培养条件和多糖含量测定同1.3.2.1。?? 　　1.3.2.3 初始pH的筛选?? 　　用1 mol/L HCl或NaOH将液体发酵培养基初始pH调至3、4、5、6、7、8、9、10、11、12，以未调整pH的培养基为对照。培养基装量为??200 mL/??500 mL????，其它培养条件和多糖含量测定同1.3.2.2。?? 　　1.3.3?φ?交试验 　　 在单因素试验基础上，以发酵液多糖含量为考察指标，采用L????9??(3????3??)正交试验表对接种量、培养基装量及培养基初始pH 3个因素进行优化。?? 　　1.4?κ?据处理 　　 使用DPS数据处理软件、正交试验设计助手ⅡV3.1分别对单因素试验及正交试验进行方差分析。?? 　　2 结果与分析 　　2.1?Φヒ蛩厥匝榻峁? 　　 接种量、培养基装量、培养基初始pH筛选试验结果见图1和图2，接种量、培养基装量、培养基初始pH分别为2.50%、200 mL和4时发酵液多糖含量显著高于其它接种量、培养基装量、培养基初始pH处理。 　　 　　2.2?φ?交试验结果 　　 依据单因素试验结果，L????9??（3????3??）正交试验3个因素（接种量、培养基装量和培养基初始pH）的水平设计见表1。 　　 　　正交试验结果见表2，可以看出，因素接种量对桦剥管孔菌发酵液中多糖含量的影响最大，培养基装量次之，培养基初始pH的影响最小；优选的最佳组合是A????1??B????2??C????3??，即接种量??2.5%??，培养基装量200 mL，培养基初始pH自然。在此组合培养条件下进行的验证