柳叶槐乙酸乙酯部位化学成分研究.docVIP

柳叶槐乙酸乙酯部位化学成分研究 　　[摘要]采用硅胶、SephadexLH-20、半制备高效液相色谱等多种色谱分离技术对豆科槐属植物柳叶槐根95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行分离纯化，从中分离得到16个化合物。经NMR，MS等波谱技术鉴定出化合物结构，其中包括12个黄酮类化合物phaseollidin（1）、L-高丽槐素（2）、2-（2′，4′-二羟基苯基）-5，6-二氧亚甲基苯并呋喃（3）、8-去甲杜鹃素（4）、甘草素（5）、染料木素（6）、6-甲基染料木素（7）、5-甲氧基染料木素（8）、7，2′，4′-三羟基-5-甲氧基异黄酮（9）、7，3′，4′-三羟基异黄酮（10）、erythribyssinD（11）、毛蕊异黄酮（12）；2个酚类化合物：顺式白藜芦醇（13）、反式白藜芦醇（14）；2个甾体化合物：豆甾醇（15）、β-谷甾醇（16）。其中，化合物1～14，16为首次从该植物中分离得到。 　　[关键词]柳叶槐；黄酮；结构鉴定；化学成分 　　柳叶槐SophoradunniiPrain为豆科槐属植物，为野生灌木，主要分布于缅甸，及云南省双江、红河、西双版纳等地。其根、叶、花、果实均有药效，民间多用于治疗咽喉肿痛、热症出血、痢疾水肿等症。该属在全世界范围内约有80种，我国约有37种，南北均有分布。据《神农百草》记载，该属植物多味苦、性寒、具有清热解毒、祛风除湿和止痛杀虫的功效，主要用于治疗咽喉、牙龈肿痛、肺热、烦渴及黄疸等症，外治诸热毒。研究发现[1-2]，豆科槐属植物主要成分为黄酮类、生物碱类和三萜类。其中，黄酮类和生物碱类成分具有多种药理作用，例如抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗病毒等活性[3-4]，在临床上，表现出抗心律失常、抗肝炎、抗鼻咽癌等疗效[5-6]。可见，对该属植物的研究具有重要意义。 　　本课题组研究发现柳叶槐具有一定的抗癌活性，前期已对柳叶槐根的乙醇提取物进行化学成分研究，分离得到6个化合物，包括2个生物碱类、2个甾体、2个硬脂酸类化合物[7]。为了进一步探究和明确其药用成分，以综合开发利用柳叶槐资源，本实验对其95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位进行化学成分研究，从中分离得到了16个化合物，其中包括12个黄酮类化合物、2个酚类化合物和2个甾体化合物。除化合物15外，其余均为首次从该植物中分离得到。 　　1材料 　　瑞士BrukerAVANCE500MHz超导核磁共振仪；LC/MS-IT-TOF系统（日本Shimadzu）；BS110S赛多利斯电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；Agilent1100型分析型高效液相色谱仪（4.6mm×250mm，5μm，Agilent），Agilent1200型半制备型高效液相色谱仪（9.4mm×250mm，5μm，Agilent）；硅胶及TLC检测用硅胶GF254板（青岛海洋化工厂）；SephadexLH-20（瑞士AmershanBiosciences）；高效液相所用试剂为色谱纯，其他所用试剂均为分析纯。 　　柳叶槐根茎采自云南石屏县，由云南大学胡志浩教授鉴定为柳叶槐S.dunnii的干燥根茎，标本保存于云南大学实验中心。 　　2提取与分离 　　柳叶槐干燥根茎12kg，粉碎，用95%乙醇进行浸泡，常温提取，共提取3次，每次2d，合并提取液，减压浓缩成浸膏后将其悬浮于水中，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，减压回收溶剂，得乙酸乙酯部位、正丁醇部位、和水部位浸膏。取乙酸乙酯部位浸膏601g，经硅胶柱色谱（氯仿-甲醇1∶0～0∶1），并结合TLC检测合并得6个部分（A～F）。 　　将组分C经硅胶柱色谱（石油醚-乙酸乙酯40∶1～0∶1）得到7个组分C1～C7。C2组分经硅胶柱色谱（石油醚-丙酮20∶1～1∶1），再经SephadexLH-20凝胶柱色谱（甲醇）纯化，最后经HPLC（40%～42%～47%乙腈，0～19～22min，36℃，3mL?min-1）制备得化合物1（2.2mg）、14（15mg）。C3组分经硅胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇1∶0～1∶1，二氯甲烷-丙酮1∶0～1∶1），得化合物2（466.3mg），3（677.1mg），15（15.0mg），16（98.5mg）。C4组分经硅胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇1∶0～0∶1），再经SephadexLH-20凝胶柱色谱（甲醇），最后经HPLC（45%～55%乙腈，0～22min，40℃，3mL?min-1）制备得化合物4（6.6mg），5（3.0mg），6（13.2mg），7（2.7mg），11（2.4mg）。 　　将组分D经硅胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇80∶1～0∶1）得到7个组分D1～D7。D6组分经硅胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇40∶1～0∶1），再经SehadexLH-20凝胶柱色谱（氯仿-甲醇1∶1）纯化