格列苯脲和尼可地尔对哮喘大鼠BALF中IL4IFNγ表达及气道重塑作用.docVIP

格列苯脲和尼可地尔对哮喘大鼠BALF中IL4IFNγ表达及气道重塑作用 　　【摘要】 目的：观察钾离子通道开放剂尼可地尔和阻滞剂格列苯脲对哮喘大鼠肺泡盥洗液（BALF）中IL-4/IFN-γ的影响以及对气道重塑的作用。方法：SD雄性大鼠50只，随机分为正常对照组、哮喘模型组、尼可地尔组、地塞米松组和格列苯脲组。采用卵清蛋白（OVA）致敏复制大鼠哮喘模型，模型成功后取相关组织分别进行图像分析测定各组支气管壁各层的厚度、ELISA检测肺泡盥洗液（BALF）中IL-4/IFN-γ表达情况。结果：哮喘模型组和格列苯脲组支气管平滑肌明显增厚（P0.05），有典型的气道重塑表现，尼可地尔组和地塞米松组无明显增厚；尼可地尔组和地塞米松组IL-4表达低于哮喘模型组和格列苯脲组，IFN-γ表达高于哮喘模型组和格列苯脲组（P0.05）。结论：尼可地尔通过开放KATP通道，能够明显改善哮喘大鼠气道炎症和抑制哮喘大鼠气道重塑的形成，其可能机制与IL-4表达降低，同时IFN-γ表达升高有关。 　　【关键词】 格列苯脲； 尼可地尔； KATP通道； IL-4/IFN-γ； 哮喘 　　气道重塑被认为是通过各种介质和细胞因子作用的炎症反应所继发的病理过程，其引起气道不可逆狭窄和气道持续高反应性，是支气管哮喘反复发作的病理基础[1-2]。因此早期阻止和减轻气道重塑成为治疗哮喘和慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）新的思路和要求。而ATP敏感性钾通道（ATP-sensitive K+ channels，KATP通道）的发现，为哮喘的基础性研究提供了一条新的途径。KATP通道是电压非依赖性配体门控通道[3-5]，通过对钾离子通道的调节可以对哮喘缓解产生有益的作用，但其作用机制尚待研究[6]。本实验采用KATP通道开放剂尼可地尔和阻滞剂格列苯脲研究对哮喘气道重塑的作用，并探讨其可能作用的有关机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 SPF级SD雄性大鼠50只，年龄10～12周，体重180～200 g。由湖北疾病预防控制中心提供。鸡卵清蛋白（ovalbulium，OVA），由Sigma公司提供；氢氧化铝，山东铝业股份有限公司；地塞米松磷酸钠注射液，湖北天药药业有限公司；尼可地尔，日本中外制药株式会社；格列苯脲，陕西森弗科技有限公司；ELISA试剂盒，武汉博士德公司。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 分组和建立模型 随机将50只大鼠分为五组，分别是正常对照组、哮喘模型组、尼可地尔组、地塞米松组和格列苯脲组。模型复制方法按文献进行[7]。雾化吸入OVA前30 min，尼可地尔组按3 mg/kg雾化吸入尼可地尔，地塞米松组按0.5 mg/kg雾化吸入地塞米松，格列苯脲组按3 mg/kg雾化吸入格列苯脲。雾化进行4周，可复制成功气道重塑模型，于末次激发24 h后麻醉处死动物，取相关组织进行检测。 　　1.2.3 计算机图像分析气道壁厚度 采用计算机图像分析系统，显微镜下观察，取5个完整的支气管横截面，分别测取支气管基底膜周径（Pbm）、总管壁面积（WAt）、内壁面积（WAi）以及平滑肌面积（WAm），并用Pbm将测量值标化，分别以WAt/Pbm、WAi/Pbm和WAm/Pbm代表相应的管壁层的厚度，并计算其平均值，用以表示气道重塑的程度。 　　1.3 统计学处理 采用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料均用（x±s）表示，进行单因素方差分析，组间以SNK法进行两两比较，以P0.05为差异有统计学意义。 　　3 讨论 　　KATP通道是电压非依赖性的、配体门控通道。研究发现，KATP通道广泛分布于神经组织、心肌、血管、气道、膀胱平滑肌及腺体组织，在调节膜电位和兴奋性方面起着重要作用[7-8]。当该通道开放时，由于一系列生化反应的作用，可有效地舒张平滑肌，从而降低血压，解除痉挛等。由于平滑肌细胞内的K+浓度远远大于细胞外的浓度，因此KATP通道有很大的几率关闭。而KATP通道的关闭，会减慢细胞膜的复极速率，最终致使气道平滑肌收缩。而使用KATP通道开放剂作用后，更多的K+转移至细胞膜外，提高了膜电位，导致气道平滑肌细胞的超极化，使自发性的电活动减少，使气道平滑肌松弛，从而缓解哮喘的临床表现[9-11]。 　　本实验发现使用KATP通道开放剂-尼可地尔可以有效缓解哮喘病理学和气道重塑变化。说明改变KATP通道的开放状态可显著影响哮喘大鼠气道重塑，但其具体的作用机制目前尚不明确。Th1/Th2比例失衡已被确定伴随着哮喘发生的各个阶段，而作为Th1/Th2特征性细胞因子的IL-4/IFN-γ则成为衡量两者水平的具体因子。另外，IL-4是由嗜碱性粒细胞、T细胞和肥大