检测子宫内膜异位症中PI3KAkt通路和VEGF临床意义.docVIP

检测子宫内膜异位症中PI3KAkt通路和VEGF临床意义 　　【摘要】目的：探讨子宫内膜异位症患者中血管内皮生长因子（VEGF）、磷脂酰肌醇-3 激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）表达水平及其与血管生成的关系，并且探讨VEGF与PI3K在调控血管生成过程中的相互关系。方法：利用S-P方法对32例EM手术标本和30例子宫肌瘤中VEGF、Akt及微血管密度（MVD）的表达进行检测。结果：EM中正常内膜、在位内膜和异位内膜Akt、VEGF 阳性表达率分别为 200%（6/30）、375%（12/32）、844%（27/32）、600%（18/30）、750%（24/32）、875%（28/32）；EM中正常内膜、在位内膜和异位内膜MVD分别是（1037±524）、（1914 ± 710）、（4824±1054）。Akt、VEGF和血管密度在EM中异位内膜较正常内膜组高表达，在调控血管生成过程中，Akt与VEGF呈正相关。结论：PI3K/Akt、VEGF 均参与EM的发生发展，在EM血管生成中发挥关键作用，共同参与EM过程。 　　【关键词】子宫内膜异位症；磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B；血管内皮生长因子 　　【中图分类号】R711【文献标志码】A 　　子宫内膜异位症（endometriosis，EM）是育龄女性的妇科疾病之一，在经期引起慢性盆腔痛，影响患者的身心健康。血管生成与EM的发生发展密切相关，血管内皮生长因子（VEGF）是关键的促血管生成因子。EM是良性的妇科疾病，但其特点，具有类似恶性肿瘤远处转移和种植生长能力，由此推断，它的发病机制可能与恶性肿瘤存在某些共同之处。在恶性肿瘤中，PI3K/AKT信号通路调控异常，上调VEGF表达，增加肿瘤血管形成。本研究拟采用EM的在位子宫内膜和异位内膜以及正常子宫内膜，S-P方法检测VEGF和Akt蛋白表达，了解EM中PI3K/Akt和VEGF是否参与EM的发生发展，为EM的防治提供新思路和理论根据。 　　1资料和方法 　　11一般资料 　　于2013年2月至2014年2月入院的在我院行手术治疗、术后病理检查确诊为EM的患者中随机抽取32例，选择的患者月经周期均规则，无生殖内分泌疾病、急慢性盆腔炎、妇科恶性肿瘤及宫内节育器放置术等，术前6月没有进行过激素类药物治疗史，没有子宫内膜病变。收集患者的异位和在位内膜作为实验组；收集无EM患者30例，取其内膜组织作为对照组。无EM患者的年龄平均约（3363±23）岁。患有EM的患者年龄平均约（354±27）岁。经检验，两组的患者在年龄、体重、月经周期和AFS分期的差异无统计学意义，各组内的平均年龄构成无统计学差异。收集的病理切片由病理科专家确诊为EM。该实验经本医院医学伦理委员会审批通过，标本收集前均与患者签订知情同意书。 　　12方法 　　121标本采集取患有EM患者的子宫内膜组织、异位内膜组织以及无EM患者的子宫内膜，10%甲醛固定，脱水、浸腊和包埋。每份标本行HE染色后，光镜下观察组织学形态，入选标本镜下检查找到内膜腺体和间质细胞。 　　122方法试剂均购自上海北诺生物科技有限公司，兔抗人Akt单克隆抗体（LS-C50301）；兔抗人VEGF 单克隆抗体（PA116948）、鼠抗人 CD34 单克隆抗体（MA137329），操作步骤按试剂盒说明书进行。 　　123结果判定VEGF 和Akt的S-P染色主要表现在腺上皮的胞质，部分在间质细胞，片状或颗粒状、深或浅棕黄色的染色被定义为阳性细胞。采取半定量方法计算阳性细胞的平均百分率，具体方法：在每张切片中采集5个高倍镜视野，并且随机计数约100个细胞，统计并计算每个视野下阳性细胞占100各细胞的平均百分比；阳性细胞数 10%的定义为（-）；在 10%～30% 之间的定义为（+）；在30%～70%的定义为 （++）；在70%以上的定义为 （+++）。CD34 抗体可用作有效地统计微血管密度（MVD）的指标，并用作定量统计，用低倍镜下挑选出最高的MVD 区，显微镜下计数5个满视野的微血管数量，求平均值，即可认为是该EM的平均微血管数目[1]。 　　13统计学方法 　　采用SPSS 130统计软件，计数资料采用χ2检验，多组间比较用单因素方差分析，变量间的相关分析选用非参数统计方法，按α=005的水准，P005则表明，拒绝零假设，说明差异有统计学意义。 　　2结果 　　表1说明：（1）VEGF、Akt、MVD在正常内膜、EM在位内膜及异位内膜组织的表达差异有统计学意义；（2）Akt、VEGF 在异位内膜较在位内膜组织及正常内膜高表达，说明Akt、VEGF可能对EM的发生、发展存在影响；（3）MVD在异位内膜高表达，说明新生血管对肿瘤的发生、转归有关键作用。 　　表2说