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混合藻体溶液中藻体浓度检测方法优化研究 　　摘 要：文章试图联用分光光度法和干重法，优化水中混合藻体生物量的检测方法，为自然水域混合藻体生物量监控提供有效措施。文章主要研究了混合藻体溶液可见光最大吸收峰值波长的测定方法、沉降时间对藻体溶液吸光值的影响，以及初步建立了混合藻体溶液“吸光值-干重”相关性的线性方程。 　　关键词：分光光度法；藻体；浓度；干重；吸光值 　　中图分类号：X832 文献标志码：A 文章编号：2095-2945（2017）20-0020-02 　　前言 　　大量有害藻体在水中堆积生长并死亡后，会产生有害藻毒素、降低水的氧容量、散发硫化氢等有毒气体给水体带来异味、细菌大量繁殖、水生动植物死亡、甚至产生致癌物危害水体安全[1]。因此，污水中藻体含量的检测对水体富营养化污染监控有重要意义。水体藻类生物量检测的基本方法有分光光度法、干重法、细胞计数法等[2]。目前水中藻类生物量检测的研究，多使用单一藻类为研究对象。但天然水体中是混合藻体，因此单一藻类检测结果并不见得适用于自然水体中藻类含量的检测。有文章[3]提到使用改良的细胞计数法测定自然水体中混合藻类的生物量。受此启发，本文设计实验了分光光度法配合干重法探索溶液中混合藻体生物量的检测方法，希望利用这种检测方法能够更加快速便捷的检测自然水体中总藻的含量。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 混合藻?w溶液的配置 　　本文所用的含混合藻体的水样是从景德镇学院生物与园林实训基地的蓄水池中取得的水样，将该水样接种至人工藻体培养液进行扩大培养，然后经过高盐除虫、蒸馏水清洗并浓缩富集后，将藻体浓缩液储藏于5℃冰箱中，供后续实验按需取用。 　　1.1.2 仪器与设备 　　752sp型紫外分光光度计，GZX-9140 MBE型电热鼓风干燥箱，BSA223S型电子天平，SHB-III型循环水式多用真空泵、ZD-85恒温振荡器、直径7.0cm定性滤纸，SB-348A曝气增氧装置、海尔BCD-186KB型冰箱、HCMJQ-100B型高压灭菌锅。布氏漏斗、塑料藻体培养容器、日光灯、蒸馏水及烧杯、试管、玻璃棒等其他实验室常用玻璃器皿。 　　1.2 方法 　　1.2.1 混合藻体的取样、放大培养和浓缩保存 　　含有混合藻体的水样取自景德镇学院生物与园林实训基地蓄水池。取500ml水样接种至10L本课题组人工配置的藻体培养液中，白天自然光辅助日光灯照明，24h曝气不间断连续培养。每周向培养体系中补充人工培养液500ml。每两周从培养容器底部收集藻体，并转移至200ml高盐溶液（近饱和盐水），常温（25℃左右）振荡处理1天，除虫抑菌。高盐处理后，抽滤藻体溶液，滤纸上的藻体转入500ml蒸馏水清洗，震荡2天充分除盐，再次抽滤后的藻体转至500ml高温高压消毒蒸馏水中。多次重复收集藻体，5℃冰箱冷藏备用。 　　1.2.2 吸光值-藻体质量相关性曲线的建立 　　（1）混合藻体溶液吸收波峰的研究 　　取少量藻体，在蒸馏水中配制两种任意浓度的藻体溶液，混匀后直接取样粗测不同波长可见光的吸光值，检测波长分别设置为420nm、450nm、500nm、550nm、600nm、650nm、700nm。 　　结果显示样品在450nm～500nm之间有最大吸收峰值。进一步在420nm～520nm处每隔10nm对样品溶液进行精测，结果显示，混合藻体溶液的可见光吸收峰值在480nm～490nm范围内。 　　（2）沉降时间与吸光值的关系研究 　　任意配制三种不同浓度的混合藻体溶液，混匀后对三个样品分别测定吸光值。取2ml溶液置于分光光度计比色皿中检测485nm波长光吸收，每隔1min测定一次，记录吸光值数据，作图分析。 　　（3）藻体溶液吸光值-藻体干重相关性曲线的建立 　　藻体溶液吸光值与其所含藻体干重相关性的研究分两步进行： 　　a.取少量混合藻体，晾干后配制成200ml藻体溶液（浓度设定为C），混匀。取100ml、50ml、25ml、12.5ml藻体溶液，后三份溶液皆定容为100ml，故其浓度分别被稀释为0.5C，0.25C，0.125C，摇匀，静置10min。测定四个混合藻体溶液样品的吸光值，作图分析。 　　b.按照由少到多的规律，随机取少量浓缩混合藻体，晾干后配制成50ml混合藻体溶液，合计11个样品，分别测定其吸光值及所含藻体干重，作图分析。 　　每个样品溶液所含藻体干重的测定方法：从配置好的50ml藻体溶液中取2ml样品检测吸光值，测定完毕后将加入比色皿的2ml藻体溶液回收，与其余48ml溶液合并。比色皿中残留的藻体用蒸馏水冲洗3次，清洗液一并并入原50ml藻体溶液。取一张抽滤滤纸，烘干（于恒温干燥箱中60℃烘2小时），尽量去除水分，称取