清上泻火汤水提取物对大鼠离体胸主动脉环舒张作用及机制.docVIP

清上泻火汤水提取物对大鼠离体胸主动脉环舒张作用及机制 　　【摘要】目的探讨清上泻火汤水提取物对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用及其机制。方法建立大鼠离体主动脉环灌流模型，观察清上泻火汤水提取物对1.0μmol/L苯肾上腺素（PE）预收缩的内皮完整血管环和去内皮血管环的舒张作用，并观察左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）和亚甲蓝（MB）预处理对清上泻火汤水提取物的舒张血管作用的影响。结果清上泻火汤水提取物（1.0，3.0mg/ml）对大鼠离体内皮完整胸主动脉环具有浓度依赖性的舒张作用；左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）（0.1mmol/L）和亚甲蓝（MB）（10μmol/L）预处理可抑制清上泻火汤水提取物的舒张作用。结论清上泻火汤提取物对大鼠离体胸主动脉环具有内皮依赖性舒张血管作用，其可能机制是主要通过NO-cGMP途径介导。 　　【关键词】血管舒张；清上泻火汤；主动脉，胸；大鼠 　　清上泻火汤记载于《方药合编》［1］，文献报道清上泻火汤主治热厥头痛、高血压和高血脂等功效［2-3］，但清上泻火汤对血管的舒张作用及机制研究目前尚不多见.本研究拟通过大鼠离体胸主动脉环实验观察清上泻火汤水提取物对血管的作用，并初步探讨其相关的作用机制。 　　1材料 　　清上泻火汤方药组成：柴胡3.75g，羌活3.00g，黄芩2.62g，知母2.62g，黄柏1.87g，灸甘草1.87g，黄芪1.87g，生地黄1.50g，黄连1.50g，藁本1.50g，升麻1.31g，防风1.31g，蔓荆子1.12g，当归1.12g，苍术1.12g，细辛1.12g，荆芥0.75g，川芎0.75g，甘草0.75g，红花0.37g。准确称取该方药318.2g，加入蒸馏水2L，在80℃温度煮沸2h，过滤减压浓缩干燥而得55.0g粉末.苯肾上腺素（phenylephrine，PE）、乙酰胆碱（acetylcholine，Ach）、左旋硝基精氨酸甲酯（Nω-nitro-L-argininemethylester，L-NAME）和亚甲蓝（methyleneblue，MB）均为美国Sigma公司产品（SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO，USA）。其余试剂为市售分析纯.实验实验动物选用SD大鼠，雄性，体重为250-300g，由延边大学医学部实验动物科提供.生理性营养液成分（Kreb’s营养液）为氯化钠115.0mmol/L、氯化钾4.7mmol/L、氯化钙2.5mmol/L、氯化镁1.2mmol/L、碳酸氢钠25.0mmol/L、磷酸二氢钠1.2mmol/L和葡萄糖10.0mmol/L组成。pH值为7.4.SQG-4型四腔器官浴槽系统、HSS-1（B）型恒温浴槽及RM6240BD型多道生理信号采集处理系统均为成都仪器厂产品。 　　2方法与结果 　　2.1大鼠离体胸主动脉环的制作腹腔注射给予大鼠3g/L戊巴比妥钠50mg/kg，待麻醉后打开胸腔，迅速分离胸主动脉。将取下的胸主动脉置入4℃的Kreb’s营养液中，小心去除血管周围的脂肪及结缔组织，将动脉剪成4mm长的血管环，操作过程中避免过度牵拉，以防损伤内皮。根据实验需要，去除血管内皮时，使用小镊子轻轻地磨擦血管环内表面，以去除内皮细胞.将血管环悬挂于经37℃预热的容量为20mL的盛有Kreb’s营养液的浴槽内，一端固定，另一端通过张力换能器连接至RM6240BD型多道生理信号采集处理系统，持续通以含有95mL/L氧和5mL/L二氧化碳的混合气体，将静息张力逐渐调节至2.0g，在37℃下稳定1h，期间每15min换液1次.用50mmol/L氯化钾刺激达峰值，用Kreb’s营养液冲洗3次，以诱发血管环的最大收缩幅度。待动脉环稳定后，换液1次，向浴槽中加入苯肾上腺素1.0μmol/L，收缩达峰值15min后，加入乙酰胆碱1.0μmol/L，若加入乙酰胆碱后使苯肾上腺素预收缩的血管舒张60-90%，可认为内皮完整，反之则认为去内皮。 　　2.2统计学处理实验数据以均数±标准偏差（χ±sD）表示，并采用t检验及ANOVA法进行统计学分析。 　　2.3清上泻火汤水提取物对苯肾上腺素引起的胸主动脉环预收缩的影响取雄性大鼠40只，随机分为5个组，即对照组、内皮完整清上泻火汤水提取物大、小剂量组和去内皮清上泻火汤水提取物大、小剂量组，每组各为8只。剖取各组大鼠胸主动脉制作内皮完整和去内皮胸主动脉环，加入1.0μmol／L苯肾上腺素，待血管环收缩稳定后，分别向内皮完整清上泻火汤水提取物大、小剂量组和去内皮清上泻火汤水提取物大、小剂量组的浴槽内累计加入1.0，3.0mg/ml清上泻火汤水提取物，向对照组内加入20mLKreb’s营养液，观察血管环的舒张反应，计算清上泻火汤水提取物各剂量组血管环的舒张百分比。舒张百分比=（苯