脂肪干细胞复合聚乳酸共聚物对大鼠骨折愈合后生物力学影响.docVIP

脂肪干细胞复合聚乳酸共聚物对大鼠骨折愈合后生物力学影响 　　【摘要】 目的 探讨脂肪干细胞（ADSCs）复合聚乳酸共聚物（PLGA）对大鼠骨折愈合后生物力学的影响。方法 56只成功建模的健康雌性大鼠， 随机分为对照组和实验组， 各28只。实验组大鼠左侧股骨骨折肢作为ADSCs组（采用单纯ADSCs治疗）， 右侧作为ADSCs/PLGA组（采用ADSCs/PLGA治疗）。比较治疗4、8周后各组大鼠患肢股骨近端生物力学参数变化。结果 治疗4、8周后， ADSCs组与ADSCs/PLGA组大鼠患肢股骨剪切强度、最大应力、最大载荷、弹性模量比对照组高， 剪切应变比对照组低， 差异均具有统计学意义（P0.05）；ADSCs/PLGA组剪切强度、最大应力、最大载荷、弹性模量比ADSCs组高， 剪切应变比ADSCs组低， 差异均有统计学意义（P0.05）。结论 ADSCs/PLGA能改善大鼠骨折愈合后的生物力学指标， 可提高骨质疏松骨折愈合力， 且效果优于ADSCs。 　　【关键词】 脂肪干细胞；聚乳酸共聚物；骨质疏松骨折；生物力学 　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.10.113 　　骨质疏松骨折多发于老年群体[1]， 目前临床治疗多采用内固定植入， 但由于该疾病大多属于粉碎性骨折， 内置物易松动、脱出， 临床疗效并不理想， 再骨折发生率高[2]。随着组织工程学的不断发展， 各类新材料的出现使骨质疏松骨折的治疗有了新的思路。PLGA是聚乙二醇酸（PGA）与聚乳酸（PLA）的共聚物， 是目前常用的支架材料， PLGA具有可塑性与生物降解性良好的优点， 且能促进骨组织的生长[3]；ADSCs在不同条件刺激下可分化成不同细胞， 恢复组织细胞的修复功能， 且易大量获得。本次实验对骨质疏松骨折进行实验报告如下。 　　1 材料与方法 　　1. 1 实验材料 　　1. 1. 1 实验动物 选取60只成年健康雌性SD大鼠作为研究对象（经筛查达到骨质疏松标准）， 3～4月龄， 体质量160～200 g；大鼠均饲养于室温（20±3）℃下， 每日12 h光照， 自由饮水进食的环境下成长。 　　1. 1. 2 实验器材 胰蛋白酶、PLGA、胎牛血清、青霉素、骨密度仪、万能力学测定机。 　　1. 2 实验方法 　　1. 2. 1 ADSCs分离和培养 取大鼠3只， 颈椎脱臼处死后常规备皮， 消毒后取颈部、背部及下肢皮下脂肪， 注意分离可见筋膜和血管， 采用磷酸缓冲盐溶液（PBS）冲洗3次；采用眼科剪将脂肪组织剪成1 mm×1 mm×1 mm组织块， 置于浓度为1.5 g/L的Ⅰ型胶原酶中， 在37℃环境下处理1 h；浸泡液通过100目筛过滤后进行离心分离， 转速为900 r/min， 时间持续10 min；含10%胎牛血清的应用DMEM液重新悬浮、接种。培养过程中需每天进行检查， 移除呈柠檬色或呈紫色的浑浊培养液；待细胞达90%汇合时， 滴入2.5 g/L胰蛋白酶进行传代培养。 　　1. 2. 2 ADSCs/PLGA复合体的构建 第3代ADSCs100%汇合后， 采用2.5 g/L胰蛋白酶进行处理， 离心后以3×109/L的细胞浓度悬浮细胞；取细胞悬液100 μl， 接种于PLGA， 置于培养皿中， 滴入含胎牛血清的DMEM培养液5 ml， 在37℃， 20 ml/L CO2培养条件下培养24 h；通过胰蛋白酶消化后进行洗涤、离心， 备用。 　　1. 2. 3 模型制作及分组干预 其余57只雌性大鼠行卵巢?Y扎摘除术， 常规喂养12周后进行骨密度筛选， 并采用线锯于大鼠双侧股骨粗隆下0.8 cm处造横向骨折， 再通过注射器针头将骨折断口逆行引导， 最后应用克氏针行髓内固定， 制成骨折模型。本次研究成功造模56只大鼠， 随机分为对照组和实验组， 各28只。对照组大鼠不做任何处理；实验组大鼠左侧股骨骨折肢进行单纯ADSCs治疗（ADSCs组）， 植入3×109/L的ADSCs悬液100 μl， 右侧（ADSCs/PLGA组）采用ADSCs/PLGA共聚物注射在骨折周围进行治疗。术后采用青霉素进行抗感染治疗， 正常喂养。治疗4、8周后， 对照组和实验组分别处死14只大鼠， 取出完整股骨， 测量生物力学参数变化。 　　1. 3 观察指标 通过三点弯曲实验测量大鼠双侧股骨第 　　4周、第8周剪切强度、剪切应变、最大应力、最大载荷、弹性模量等生物力学参数变化（对照组取双侧均值）。 　　1. 4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P0.05表示差异有统计学意义。 　　2 结果 　　治疗4、8