肿瘤坏死因子α在中耳胆脂瘤中定量表达及其在骨吸收中作用.docVIP

肿瘤坏死因子α在中耳胆脂瘤中定量表达及其在骨吸收中作用 　　[摘要] 目的：探讨TNF-α在中耳胆脂瘤中的定量表达及引起骨吸收的作用机制，明确TNF-α在中耳胆脂瘤发病中的作用。方法：2001年9月~2006年6月，我院手术治疗的中耳胆脂瘤患者36例，取其胆脂瘤组织及外耳道皮肤标本，采用双抗体夹心ELISA法检测标本中TNF-α的浓度。结果：胆脂瘤组中TNF-α的含量为（90.3±9.9） pg/ml，正常外耳道皮肤中TNF-α的含量为（29.4±2.5） pg/ml，两者比较，存在极显著性差异（P＜0.001）；TNA-α在侵蚀1个听小骨胆脂瘤中的含量为（50.7±9.0） pg/ml，明显低于TNF-a在侵蚀两个或3个听下骨胆脂瘤中的含量（107.7±13.5） pg/ml，两者之间存在非常显著性差异（P＜0.01）。结论：本课题是通过对中耳胆脂瘤组织及外耳道皮肤中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的定量检测，发现其与胆脂瘤的发生、发展有关。 　　[关键词] 中耳炎；胆脂瘤；肿瘤坏死因子 　　[中图分类号] R764.2 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2008）03（c）-034-02 　　 　　中耳胆脂瘤是一种中耳慢性疾病，具有侵袭性、破坏性、迁移性、非正常调控下的增殖性、分化变异性、复发性等特点，有的生长迅速可引起严重听力损失、反复感染、前庭功能紊乱、颅内外并发症，甚至威胁生命。中耳胆脂瘤的重要病理特点是中耳腔内存在高度增殖的角化鳞状上皮和邻近骨质的破坏，导致中耳上皮碎屑的堆积。目前，关于引起上皮高度增殖、骨破坏吸收机制方面的研究表明，局部炎症反应在胆脂瘤发生、发展过程中起着重要作用。 　　肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是一种与中耳胆脂瘤发病有关的重要的生长因子，其主要来自于活化的巨噬细胞、肥大细胞、成骨细胞样细胞和角化细胞等。TNF-α是一种多生物功能多肽，可引起肿瘤细胞坏死，同时在各种炎症疾病中起着重要作用。本课题研究是应用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测TNF-α在中耳胆脂瘤组织中的定量表达，研究其与胆脂瘤发生、发展的相关性，探讨引起胆脂瘤骨质吸收破坏的可能机制。 　　1材料与方法 　　1.1临床资料 　　收集实验标本来源于我院2001年9月~2006年6月住院手术治疗的36例中耳胆脂瘤患者，患者年龄7~68岁，平均28.5岁；其中，男27例，女9例。 　　1.2 样本收集、制备和检测方法 　　1.2.1样本收集胆脂瘤组织及外耳道皮肤标本取自 36例住院手术的中耳胆脂瘤患者，术中将所取胆脂瘤上皮及上皮下组织保持不分离，用无菌生理盐水洗涤，无菌纱布轻压吸取水分后立即储存于-80℃之冰箱中冰冻、待测。皮肤标本采取同样方法处理。 　　1.2.2主要试剂人肿瘤坏死因子-α酶联免疫检测试剂盒，深圳晶美生物工程有限公司生产。 　　1.3实验方法 　　本实验采用双抗体夹心ELISA法，①将标本解冻，按比例加入0.55 mol/L蔗糖和含三硝基甲苯的Triton-X100溶液，作成浓度每毫升含30 mg组织的匀浆，以15 000 rpm离心10 min，取其上清液待检。②取出所需板条，其他板条密封放回4℃。留一空白孔，将其他孔中加入标本和已稀释好的不同浓度的标准品各20 μl至相应孔中，每孔加入已稀释好的生物素化抗体100 μl，用封板胶纸封住反应孔，室温（20~25℃静置）60 min。洗板4次。③每孔加终止液50 μl，混匀。5 min内测OD450值。通过绘制标准曲线，求出标本中TNF-α浓度。 　　1.4统计方法 　　采用成组设计资料均数的t检验对测的数据按胆脂瘤组、正常外耳道皮肤组与侵蚀1个听小骨胆脂瘤组、侵蚀两个或3个听小骨胆脂瘤组之间均数进行比较。 　　2结果 　　2.1胆脂瘤组与正常外耳道皮肤组中TNF-α含量比较 　　胆脂瘤组中TNF-α的含量为（90.3±9.9） pg/ml，正常外耳道皮肤中TNF-α的含量为（29.4±2.5） pg/ml，其间存在极显著性差异（P＜0.001），说明TNF-α在胆脂瘤组织与正常外耳道上皮中的含量存在显著性差异，TNF-α参与了胆脂瘤的发展。见表1。 　　2.2 TNF-α在侵蚀不同数目听小骨胆脂瘤组织中含量比较 　　TNA-α在侵蚀1个听小骨胆脂瘤中的含量为（50.7±9.0） pg/ml，明显低于TNF-α在侵蚀两个或3个听下骨胆脂瘤中的含量（107.7±13.5） pg/ml。二者之间存在非常显著性差异（P＜0.01），说明TNF-α参与了胆脂瘤骨质破坏过程。见表2。 　　 　　3讨论 　　中耳胆脂瘤是慢性化脓性中耳炎的一种，是一种位于中耳内的囊状结构。囊的内皮为复层鳞状上皮，囊外为一层厚薄不一纤维组织与临