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肿瘤型M2丙酮酸激酶在结直肠癌中研究进展 　　【摘要】 M2-PK是丙酮酸激酶的一种同工酶， 在正常细胞中， M2-PK主要以四聚体形式存在， 而在肿瘤中， M2-PK大量表达并主要以二聚体形式存在， 故又称为肿瘤型丙酮酸激酶（Tu M2-PK）[1].Tu M2-PK的高表达 与结直肠癌密切相关，是一个新认识的CRC血清标志物，可能作为一个潜在的早期检测CRC标志物。 　　【关键词】 肿瘤型M2丙酮酸激酶； 结直肠癌；标志物 　　【中图分类号】R732.3 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0019（2014）03-0047-01 　　肠癌是常见的恶性肿瘤之一，仅次于肺癌、乳腺癌居恶性肿瘤发病率的第三位。近年来，其发病率和死亡率都呈逐年上升趋势，并且发病年龄明显提前。因此CRC的早期诊断就成为一个研究重点。近年来，TU M2-PK作为一种新型的肿瘤标志物，对结直肠癌的辅助诊断有一定的临床价值，可以作为一项新的肿瘤标志物应用。 　　1 Tu M2-PK的生物学特性 　　丙酮酸激酶（pyruvate kinase PK）是糖酵解途径的一个关键酶， 相对分子质量约为240 000，它有4种不同的同工酶，分别为L型、R型、M1型、M2型，所有这些亚型都以高活性的四聚体形式存在。但在肿瘤细胞中，PK 的组织特异性同工酶（L 型、R 型、M1 型 PK 等） 表达减少，并在 ATP-1，6-二磷酸果糖，丝氨酸以及不同的癌蛋白（pp60v-src HPV-16 E7） 之间的相互作用下，四聚体的M2-PK亚型裂解，使得二聚体形式成为主流，表现为肿瘤细胞特异性的代谢特征，因此称为TU M2-PK（tumorM2 pyruvate kinase）。肿瘤型M2-PK可能因肿瘤坏死或细胞转化而被释放入体液， 通常以无活性的二聚体形式占据主要地位，故在体液中可被检测[2]。肿瘤细胞中高表达 M2-PK，它对于有氧糖酵解是必需的，同时这种代谢方式为肿瘤细胞的生长提供了选择性生长优势，促进肿瘤形成和转移[3]。由于 M2-PK 的高活性四聚体形式与低活性二聚体形式之间存在动态转换，并且与底物磷酸烯醇式丙酮酸（phosphoenolpyuvate，PEP） 亲和力有强弱之分，故而会导致磷酸烯醇类物质的堆积，这有利于肿瘤细胞向大分子合成的方向进行，以保证细胞中的能量的供给[4]。 　　2 TU M 2-PK的检测方法 　　2.1 血浆检测（夹心ELISA法）：其反应原理为与PK其他同工酶无交叉反应的单克隆抗体与M2-PK发生特异性反应用抗M2-PK的单克隆抗体包被出微量浓度测定板，血清样本中的M2-PK可与包被的抗体结合，加入生物素化单克隆抗体与M2-PK结合，然后加入链霉亲和素2过氧化物酶结合物，使之与生物素结合，颜色强度用酶联检测仪测定。全部反应需3 h，血清M2-PK测量范围是（5～100） kUPL，此方法必须使用乙二胺四乙酸盐（EDTA）抗凝血，，因EDTA抗凝血浆中的M2-PK含量较血清受外界因素影响较小，重复性及稳定性较好[5]。现多用德国ScheBoBiotech公司研制出双抗体夹心的ELISA法，其检测阴性参考值分别为15 U/ml。 　　2.2 粪便检测：检测粪便是对消化系疾病简便特异的方法。可用夹心ELISA法， 选用的试剂与血浆检测相同，原理一致。其检测阴性参考值为4U/ml。最好与血清同时检测。 　　2.3 免疫组织化学法：现已制备单克隆抗体。组织切片标本可制成冰冻、石蜡切片，先将切片脱蜡，水化， EDTA抗原修复液抗原修复，最好用EDTA抗原修复液，用一般热修复也可，滴加一抗室温静置1 h或4e过夜，染色在胞浆。免疫组织化学法多使用于肾癌检测。，但近年在肺癌中研究有所增多。现已由德国ScheBo Biotech公司研制出一种可通过体液检测TUM2-PK的量，从而检测肿瘤的方法，其检测原理是双抗体夹心ELISA法。目前其试剂盒分为血检测型和粪便检测型两种，阴性参考值分别为15U/ml和4U/ml。 　　2.4 胸水检测：方法与试剂同血清检测，但正常值范围尚无统一标准，有学者用良性疾病组TUM2-PK的均值+2标准差作为良恶性胸水的界限[6]。 　　3 TU M 2-PK在结直肠癌中的研究现状 　　3.1 早期诊断价值：卢仁泉等[7]以血浆肿瘤型M2-PK15 U/mL为阳性诊断标准，结肠癌的诊断敏感性为71.9%；张波等[8]通过酶联免疫吸附法对80例结直肠癌患者的粪便肿瘤型M2-PK进行检测，其总体敏感度为77.5%，特异度为92.5%； Shastri等[9]以Tu M2-PK4 U/mL为阈值水平，检测结肠癌粪便Tu M2-PK，研究发现敏感度73%，特异度78%。TuM2-PK对于结肠癌的