荜茇酰胺杀伤胶质母细胞瘤和肝癌细胞的作用及其机制-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 I 万方数据 缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 DCFH-DA 2’-,7’-Dichlorofluorescin diacetate 2-,7-二氯荧光素二乙酸酯 DMSODimethyl sulfoxide二甲基亚砜ErkExtracellular signal-regulated kinase胞外信号调节激酶FBSFetal bovine serum胎牛血清FCMFlow cytometry流式细胞仪GBMGlioblastoma multiforme胶质母细胞瘤GSHGlutathione谷胱甘肽JNKC-Jun N-terminal kinasec-Jun 氨基末端激酶LC50Lethal concentration 50半数致死量NACN-acetyl-L-cysteineN-乙酰半胱氨酸PBSPhosphate buffered saline磷酸盐缓冲液PIPropidium iodide碘化丙啶PLPiperlongumine荜茇酰胺ROSReactive oxygen species活性氧EREndoplasmic reticulum内质网HCCHepatocellular carcinoma肝细胞肝癌UPRUnfolded protein response未折叠蛋白反应II 万方数据 中文摘要 第一部分 荜茇酰胺选择性杀伤胶质母细胞瘤细胞的作用和机制 研究背景：荜茇酰胺（Piperlongumine, PL）是一种从长柄胡椒中分离出的天然生物碱， 具有选择性杀伤一些肿瘤细胞的作用。但荜茇酰胺是否对胶质母细胞瘤具有杀伤作用还 不清楚。本实验主要研究荜茇酰胺对胶质母细胞瘤细胞的杀死作用和机制。 方法：3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验和流式细胞仪方法测定 细胞活力和凋亡。Hoechst 33342核染色观察细胞死亡。Western blot测定p-JNK/JNK、 p-p38/p38、p-Erk/Erk和p-Akt/Akt等蛋白表达水平。DCFH-DA染色测定活性氧水平。微 量谷胱甘肽试剂盒测定细胞内谷胱甘肽的水平。流式细胞仪检测细胞周期。 结果： 荜茇酰胺（20 μM）可诱导三种胶质母细胞瘤细胞株(LN229，U87和8MG) 细胞 死亡，而对原代培养的大鼠星形胶质细胞则无明显杀伤作用。荜茇酰胺显著升高LN229 和U87细胞中活性氧（ROS）水平，同时降低还原型谷胱甘肽（GSH）水平。抗氧化剂 N-乙酰基-L-半胱氨酸（NAC）完全逆转荜茇酰胺对LN229和U87的细胞杀伤作用和??性 氧升高。荜茇酰胺处理 LN229和U87细胞后显著激活JNK和p38，具有剂量依赖性，但 对Erk和Akt激活无影响。NAC完全阻断荜茇酰胺对JNK和p38的激活作用。JNK和p38特 异性抑制剂SP600125和SB203580明显降低由荜茇酰胺诱导的细胞死亡。 结论：荜茇酰胺通过诱导活性氧水平升高，进而激活JNK 和p38，发挥选择性杀伤胶质 母细胞瘤细胞的作用。 关键词：荜茇酰胺；氧化应激；胶质母细胞瘤；细胞凋亡；肿瘤治疗  PAGE 5 万方数据 第二部分 荜茇酰胺杀伤肝癌细胞的作用和机制 研究背景：荜茇酰胺可通过升高 ROS 水平特异性杀死癌细胞，具有肿瘤治疗前景。但 荜茇酰胺对肝癌细胞的作用尚未见报道。本实验主要研究荜茇酰胺体内外杀伤肝癌细胞 的作用和机制。 方法： MTT 实验测定细胞活力。Hoechst 33342 核染色、PI 染色和台盼蓝染色观察细胞 死亡。DCFH-DA 染色测定活性氧水平。微量谷胱甘肽试剂盒测定细胞内谷胱甘肽的水 平。Fluo-3 AM 荧光探针测定细胞内 Ca2 +的变化。Wetern blot 测定内质网应激和凋亡相 关蛋白表达和激活水平。H22 细胞皮下注射构建体内肝肿瘤模型，检测荜茇酰胺在体内 的肝癌治疗作用。 结果：荜茇酰胺的肝癌细胞(HepG2 和 Huh7)半数抑制浓度(IC50)为 10-20 μM。荜茇酰胺 显著提高肝癌细胞 ROS 的水平并降低还原型谷胱甘肽水平。NAC 和 GSH 完全逆转荜 茇酰胺诱导的细胞死亡。荜茇酰胺引起肝癌细胞的内质网应激反应致使 Ca2 +释放， PERK、 p38 和 JNK 激酶活化，Grp78、IRE1α、CHOP（GADD 153）蛋白表达升高。 在 H22 细胞的肝癌模型中，荜茇酰胺明显抑制肿瘤生长。 结论：荜茇酰胺通过升高 ROS 干扰内质网应激发挥体内外杀伤肝癌细胞的作用。 关键词： 荜茇酰胺；内