比较兔不同动脉间tes基因的表达及其与动脉粥样的关系及可能的机制-临床医学专业论文.docx

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 本论文属于 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 不保密 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津 天津医科大学博士学位论文 中文摘要 背景： 动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）是多发性疾病，是目前人类致死和致残 的主要原因。AS 的病理改变以动脉内脂质沉积，粥样斑块形成及伴随的炎症反 应为特征，造成血管部分或完全堵塞进而导致心、脑、肾等多器官缺血、梗死， 给人类健康造成极大的危害。大量研究已经表明不同动脉间发生动脉粥样硬化 的程 度存 在差 别， 其中 冠状 动脉较 易发 生粥 样硬 化， 而内 乳动脉 （internal mammary artery, IMA）粥样硬化发生率较低。正是这种差别的存在，使得内乳 动脉成为了冠状动脉旁路移植术（coronary artery bypass grafting ，CABG）左前 降支首选的替代血管。目前已有研究表明：在冠脉搭桥手术后 20 年，IMA 通畅 率仍可大于 90％。故此，内乳动脉的这种血管特性已成为当前研究的热点。然 而，目前这种血管特性的机制还没有完全阐明。 睾丸相关转录因子（testis derived transcript，TES）基因是近年来新发现的 基因，其定位于人体染色体7q31.2上，编码一个含421个氨基酸的蛋白质（testin）。 testin是一种细胞骨架蛋白，主要分布于黏着斑和细胞间连接的区域，可以与一 系列细胞骨架蛋白结合。目前研究普遍认为TES基因是一种抑癌基因。2012年 Archacki等人首次研究了TES基因与动脉粥样硬化的关系，他们发现TES基因在 IMA的表达高于冠状动脉左前降支（left anterior descending，LAD），并且冠心病 患者LAD的TES基因表达低于非冠心病者。然而，TES基因在AS发生发展过程中 起到何种作用及其相应的分子生物学机制目前尚不明确。 通过比较内乳动脉与冠状动脉形态学及分子学的差异从而寻找影响动脉粥 样硬化发生发展过程中的关键因素可能成为揭示动脉粥样硬化发生机制的非常 重要的思路和方法，从而为防止动脉粥样硬化发生发展提供新的手段。 目的： 本课题旨在通过比较 TES 基因在正常兔内乳动脉和冠状动脉间的表达，以 及其在高脂喂养 3 个月后兔内乳动脉和冠状动脉间的表达，明确 TES 基因在内 乳动脉与冠状动脉间的血管差异及对高脂的应答差异中的作用。同时进行原代 内皮细胞培养，明确两种来源内皮细胞表达 TES 的情况。通过在人脐静脉内皮 细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）过表达 TES 基因和下调 I TES 基因，观察 TES 基因对内皮细胞功能的影响，阐明 TES 基因与动脉粥样硬 化的关系及其可能的机制，为动脉粥样硬化的研究提供新的思路和靶点。 方法： 1.应用 H-E 染色法观察正常家兔内乳动脉和冠状动脉管壁形态，分别用 RT-PCR、Real-Time PCR、Western blotting 和免疫组化等方法从 mRNA、蛋白 及组织三个水平检测 TES 基因在内乳动脉和冠状动脉中的表达情况。同时，用 酶消化法分离正常家兔内乳动脉和冠状动脉的内皮细胞进行原代细胞培养，采 用 RT-PCR、Real-Time PCR 及 Western blotting 等方法比较这两种来源不同的内 皮细胞 TES 基因表达的差别。 2.通过高脂饲养兔 12 周建立动脉粥样硬化模型，用 H-E 染色法观察内乳动 脉和冠状动脉管壁形态，分析评估两种血管动脉粥样硬化的发生情况，同时采 用 RT-PCR、Real-Time PCR 和 Western blotting 等方法从 mRNA 及蛋白等水平 比较高脂喂养前后内乳动脉与冠状动脉中 TES 的表达差异。 3.选取 HUVECs，通过构建过表达 TES 的质粒和 shRNA 干