吡哆胺和替米沙坦对angⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响-老年医学专业论文.docxVIP

 PAGE 7 吡哆胺和替米沙坦对 AngⅡ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响 中文摘要 目的： 探讨吡哆胺和替米沙坦对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ, AngⅡ）诱导的自发性高血 压大鼠（spontaneously hypertensive rat，SHR)血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）增殖、迁移的影响及其机制。 方法： 采用组织贴块法原代培养来自 SHR 胸主动脉的 VSMCs，选取 3～5 代细胞进行实验， 将培养的细胞随机分为对照组（未加任何干预因素），AngⅡ组（10-7mol/L AngⅡ），P 组（1mmol/L 吡哆胺+10-7mol/L AngⅡ）、T 组（10-7mol/L 替米沙坦+10-7mol/L AngⅡ）、 TP 组（1mmol/L 吡哆胺+10-7mol/L 替米沙坦+10-7mol/L AngⅡ）。采用四甲基偶氮唑蓝 (methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法检测 VSMCs 增殖，划痕法检测 VSMCs 迁移，酶 联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液晚期糖基化终末产物（advanced glycation end-products, AGEs）浓度，流式细胞术分析细胞内活性氧簇（reactive oxygen species, ROS）水平，Real-time PCR 检测晚期糖基化终末产物受体（receptor for AGEs，RAGE）、 核因子-κB P65（nuclear factor of kappaB P65，NF-κB P65）、还原型烟酰胺腺嘌呤磷酸 氧化酶 P47phox（nicotinamide adenine phosphate oxidase P47phox，NADPH P47phox）、 基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）的 mRNA 表达水平，Western Blot 检测 RAGE、NF-κB-P65 蛋白水平。 结果： 1.MTT 法检测细胞增殖及划痕法检测细胞迁移，结果显示：AngⅡ组吸光度值（即 OD 值）及迁移细胞数较对照组显著升高（P﹤0.01），P 组、T 组及 TP 组较 AngⅡ组显 著下降（P﹤0.01），且 TP 组较 P 组及 T 组显著下降（P﹤0.01）。 .与对照组相比，AngⅡ组细胞上清液 AGEs 浓度及细胞内 ROS 水平显著升高（P ﹤0.001）；与 AngⅡ诱导组相比，P 组和 T 组干预后的 AEGs 浓度和 ROS 水平均显著降 低（P﹤0.001）；其中联合用药组显著低于单一用药组（P﹤0.001）。 Real-time PCR 结果显示：AngⅡ组的 RAGE、NF-κB-P65、NADPH P47phox、 MMP-9 的 mRNA 表达水平显著高于对照组（P﹤0.01），P 组、T 组及 TP 组显著低于 Ang Ⅱ组（P﹤0.01），TP 组显著低于 P 组及 T 组（P﹤0.01）。 Western Blot 检测 RAGE、NF-κB-P65 蛋白表达：与对照组相比，AngⅡ组的 RAGE、 NF-κB-P65 蛋白表达水平显著升高（P﹤0.01），P 组和 T 组干预后的 RAGE、NF-κB-P65 蛋白表达显著低于 AngⅡ组（P﹤0.01），且联合用药组显著低于单一用药组（P﹤0.01）。 结论： 1.吡哆胺抑制 AngⅡ诱导的 VSMCs 增殖及迁移，其机制可能与吡哆胺抑制 AGEs 形成，降低细胞内 ROS 水平，减少 RAGE、NF-κB-P65、MMP-9 和 NADPH P47phox 表达有关。 2.替米沙坦抑制 AngⅡ诱导的 VSMCs 增殖及迁移，可能主要通过阻断血管紧张素Ⅱ 1 型受体（Angiotensin II type 1 receptor，AT1R)，降低细胞内 ROS 水平，抑制 NF-κB-P65、 MMP-9 和 NADPH P47phox 表达途径。 .合用吡哆胺和替米沙坦可协同抑制 AngⅡ诱导的 VSMCs 增殖和迁移，其机制可能 是吡哆胺及替米沙坦分别从 AGEs 及 AngⅡ两个方面，协同降低细胞内 ROS 水平，抑制 NF-κB-P65、MMP-9 和 NADPH P47phox 表达。 关键词： 血管平滑肌细胞 血管紧张素Ⅱ 晚期糖基化终末产物 活性氧簇 吡哆胺 替米沙坦 Effects of Pyridoxamine and Telmisartan on Proliferation and Migration of Rat Vascular Smooth Muscle Cells