黄瓜褐斑病菌菌丝蛋白对小麦种子萌发生长及抗旱性影响.docVIP

黄瓜褐斑病菌菌丝蛋白对小麦种子萌发生长及抗旱性影响 　　摘要：通过液体发酵培养获得黄瓜褐斑病菌菌丝，再经反复冻融法获得菌丝蛋白，研究不同浓度菌丝蛋白对小麦种子萌发及生长的影响。结果表明，黄瓜褐斑病菌菌丝蛋白能显著促进小麦种子萌发及幼苗生长，具有激活蛋白的功能。不同浓度菌丝蛋白对小麦种子萌发及幼苗生长的促进作用不同，其中以0.625mg/mL菌丝蛋白对小麦种子萌发及生长的促进作用最明显：种子萌发率从70%提高到85%；处理5、7、9、11d幼苗株高与对照组相比分别提高25%、50%、58%、45%。小麦抗旱性诱导作用也以0.625mg/mL菌丝蛋白处理的小麦最佳，与对照相比，幼苗存活率提高21.28百分点，抗衰度提高19.58百分点，苗抗旱综合系数从35.45提高到55.88，是对照的1.57倍，根系活力是对照的2倍。 　　关键词：黄瓜褐斑病；菌丝蛋白；激活蛋白；种子萌发；生长；抗旱性；小麦 　　中图分类号：S512.101文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）11-0159-02 　　激活蛋白是一类从真菌中分离的、具有激发子功能的新型蛋白质。激活蛋白主要通过激活植物体内分子免疫系统，提高植物自身免疫力，激发植物体内的一系列代谢调控，促进植物根、茎、叶生长和叶绿素含量提高，从而达到提高作物产量的目的[1]。基因芯片分析结果表明，激活蛋白处理后，水稻一系列与防御和生长相关的基因上调表达[2]。激活蛋白能诱导多种植物产生系统抗性，促进植物生长，改善作物品质。激活蛋白在交链孢菌（Alternariasp.）、纹枯病菌（Rhizoctoniasolani）、黄曲霉菌（Aspergillussp.）、稻瘟菌（Magnaportegrisea）、青霉菌（Penicilliumsp.）、木霉菌（Trichodermasp.）、镰刀菌（Fusariumsp.）等多种真菌中都有发现[3]，不同来源的蛋白激发子在理化性质上略有差异，但生物活性相似。为进一步发掘具有我国自主知识产权的新型激活蛋白，本研究以黄瓜褐斑病菌为试验材料，通过液体发酵获得菌丝，低温提取其蛋白，研究其生物功能。 　　1材料与方法 　　1.1主要材料和仪器 　　黄瓜褐斑病菌由沈阳农业大学植物保护学院生物农药实验室提供。 　　离心机，恒温水浴锅，电子天平，旋转蒸发仪，真空干燥箱，培养皿（直径90mm），自动恒温箱。 　　1.2方法 　　1.2.1黄瓜褐斑病菌菌丝体的培养 　　用接种针挑取少许黄瓜褐斑病菌菌丝，接种到PDA固体培养基上，放置在培养箱中28℃恒温培养7d后，取直径1cm的固体培养菌块接种到200mLYPD液体培养基中，于28℃恒温振荡培养4～5d，真空抽滤收集菌丝体，用双蒸水反复洗涤4次，低温干燥。 　　1.2.2黄瓜褐斑病菌菌丝蛋白的获得 　　取黄瓜褐斑病菌菌丝体10g，用粉碎机粉碎，置于烧杯中于-25℃反复冻融2次，在高速冷冻离心机上12000r/min离心15min，收集上清，冷冻干燥，冻存于-20℃冰箱中备用。 　　1.2.3黄瓜褐斑病菌菌丝蛋白含量的测定 　　蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法。 　　蛋白质标准曲线：取牛血清白蛋白，配制成浓度1mg/mL，用蒸馏水分别稀释成浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL。准确吸取所配各管溶液0.1mL，分别放入具塞试管中，加入5mL考马斯亮蓝G-250试剂，混匀，放置2min后，在595nm处测定吸光度。 　　菌丝蛋白含量测定：称取菌丝蛋白，用蒸馏水配制成浓度梯度。分别量取上述溶液0.1mL并放入20mL具塞试管中，加入5mL考马斯亮蓝G-250试剂，将试管中溶液缓慢混合均匀，放置2min后，在595nm处测定吸光度。 　　1.2.4黄瓜褐斑病菌菌丝蛋白对小麦种子萌发及幼苗生长的影响[4-5] 　　取籽粒饱满的小麦种子，消毒后用不同浓度菌丝蛋白浸种8h，每处理20粒种子，置于铺有滤纸的培养皿中，以蒸馏水为对照，12h后记录发芽率，于培养5、7、9、11d时测量株高。 　　1.2.5黄瓜褐斑病菌菌丝蛋白对小麦抗旱性诱导作用的影响[6] 　　取健康饱满的小麦种子，消毒后用不同浓度菌丝蛋白浸种8h，每处理20粒种子置于铺有滤纸的培养皿中，然后加入60g石英砂，以蒸馏水为对照，适时补水。小麦生长14d时停止补水，进行干旱胁迫，当70%植株萎蔫、叶片卷成针状时复水，再次干旱胁迫后，再复水，1d后统计幼苗存活率和叶片抗衰度，计算幼苗抗旱综合系数。各处理均重复3次。 　　幼苗存活率=（第1次干旱胁迫后存活株数/第1次干旱胁迫前株数+第2次干旱胁迫后存活株数/第1次干旱胁迫后存活株数）×0.5×100%； 　　叶片抗衰度=（叶片绿色段长/叶片全长）×100%；