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鸭坦布苏病毒竞争定量PCR检测方法建立与应用 　　摘要： 在现行PCR检测鸭坦布苏病毒（DTMUV）方法的基础上，设计制备DTMUV竞争模板并以其为定量内标物建立竞争定量PCR（QC-PCR）体系。该体系特异性强、灵敏性高，竞争模板和目标模板可在400个分子/μL的水平上共扩增。临床应用结果表明，建立的体系能够满足简单快速确定病毒含量的要求。 　　关键词：鸭坦布苏病毒；竞争定量PCR；定量检测 　　中图分类号：S858.32文献标识号：A文章编号：1001-4942（2015）03-0113-05 　　Establishment and Application of Quantitatively 　　Competitive PCR System for DTMUV Detection 　　Yuan Peng1，2*， Wang Bin3*， Xu Chuantian1， Yang Shaohua1， Huang Qinghua1， Zhang Xiumei1， Zhang Lin1** 　　（1.Institute of Animal Science and Veterinary Medicine， Shandong Academy of Agricultural Sciences/Shandong Key Laboratory of 　　Animal Diseases Control and Animal Breeding， Jinan 250100， China；2. College of Animal Science and Technology， Shandong Agricultural 　　University， Taian 271018， China； 3. Department of Bio-Engineering， Henan Institute of Science and Technology， Xinxiang 453003， China） 　　AbstractBased on the traditional PCR method for DTMUV detection， the competitive template targeting to DTMUV NS5 gene was designed and used as competitor in the quantitatively competitive PCR （QC-PCR） system with high specificity and sensitivity. The target and competitive templates could be co-amplified at the level of 400 molecules per microliter. The clinical application results indicated that the developed QC-PCR could simply， rapidly and quantitatively diagnose the content of DTMUV. 　　Key wordsDTMUV；QC-PCR；Quantitative detection 　　目前我国养鸭业迅速发展，肉鸭、蛋鸭存栏量和鸭肉出口量均居世界首位，但近年来随着养殖规模的扩大，鸭病的发生也呈上升趋势，对养鸭业的危害日益严重。2010年，一种新型的鸭源黄病毒――鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu Virus， DTMUV）在我国规模化养鸭场爆发并迅速蔓延至全国，给我国养鸭业带来了巨大的经济损失[1，2]，据统计，该病仅在2010年造成的经济损失就达50亿元。 　　DTMUV属黄病毒科、黄病毒属，为有囊膜不分节段单股正链RNA病毒[3]。鸭感染DTMUV后主要出现神经症状、采食量减少、产蛋严重下降甚至绝产???并引起大量死亡。同时感染DTMUV的鸭还容易继发传染性浆膜炎、大肠杆菌病等其他疾病，且疾病发生后由于大量应用药物，导致药物残留严重，影响到鸭肉品质和人类健康。此外，近年来动物流感（H1N1、H7N9、H10N8）相继爆发，病毒多次感染人类，造成死亡，严重危害人类健康，而水禽是流感病毒的重要自然储存宿主。因此，控制鸭病毒性疾病的流行，不仅能够减少养鸭业的经济损失，而且能够促进鸭产业链的健康发展，保障人类健康。 　　目前尚没有针对性的治疗鸭坦布苏病毒感染的药物，亦缺乏有效的疫苗，因此对病毒进行深入研究、开发预防性和治疗性药物势在必行。但DTMUV活力较差，体外培养稳定性不足[4]，这种特性使得其滴度变化快，相关深入研究困难极大，所以找到一种能够快速