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浅谈化学教学中黄原胶制备 　　摘要：黄原胶发酵生产过程中，使用淀粉作为碳源优于其他碳源。用硅藻土过滤法比较经济，酶降解法更明显地提高了黄原胶的质量。超滤处理可将黄原胶发酵液中多糖质量分数由原来的2％浓缩到8％以上，节省乙醇用量，降低成本。用乙醇沉淀浓缩后的黄原胶发酵液，产品的纯度和收率均较高。 　　关键词：黄原胶；发酵；超滤 　　 　　在化学教学中，黄原胶是用黄单胞菌经微生物发酵制取的生物细胞外粘多糖，具有良好的增黏性、耐酸碱性和抗高温性，能耐高浓度盐，具有乳化和均匀悬浮颗粒等性能，可广泛应用于食品、石油、陶瓷、纺织、印染、医药、造纸、地矿、灭火、涂料、化妆品等20多个行业，用微生物发酵的方法生产黄原胶在国内外有着广泛的前景，并且越来越引起人们的重视。 　　但由于黄原胶发酵液的黏度很高，采用过滤的方法不能有效去除其中的菌体，加之发酵液中黄原胶的含量很低(质量分数只有1％～5％)，传统的分离方法非常浪费能源和材科。本文探讨了影响黄原胶产量的一系列因素，得出了黄原胶发酵的最佳条件和提纯及分离的技术。 　　 　　一、 材料与方法 　　 　　1. 菌种 　　野生油莱黄单胞菌 　　(Xanthomonas Campestris) 　　2. 种子培养基 　　 　　3. 发酵培养基 　　 　　4. 发酵条件 　　(1)碳源。碳源是生物发酵的一个重要影响因素。实验采用蔗糖、乳糖、葡萄糖和淀粉四种物质作为碳源，通过测定发酵液的黏度，可以考察碳源对发酵效果的影响。从表1可以看出淀粉作为碳源发酵液的黏度高于其他碳源的发酵液粘度。 　　 　　(2) pH值。pH对发酵液黏度的影响见表2。 　　 　　黄原胶发酵周期为48～56h，24h前主要是菌体生长，24h以后进入产胶期，36h左右产胶达到高峰。最有利于菌体生长的pH值为6.0～6.3，而pH值在7.3～7.6最适合胶的生产。产胶时pH值不断下降会抑制糖基载体的活性，从而影响产胶。当pH值降到5.4后，产胶完全停止。因此，发酵过程中必须保持pH中性。 　　(3) 消泡剂。发酵中后期，随黄原胶生产发酵液黏度增大，代谢产生的CO2无法及时逸出而在液面处生成泡沫层，这对溶氧极为不利。若泡沫溢出发酵罐，还会导致染菌。消泡剂对发酵液逸出度的影响见表3。 　　 　　由表3可看出对黄单胞菌这类易污染的菌体，菜籽油适合作消泡剂，菜籽油作消泡剂时，可参与菌体代谢并最终被分解。 　　 　　二、 提纯与浓缩 　　 　　从发酵罐取出的发酵液尚含有质量分数为95％以上的水分，以及一些未消耗的碳源、氮源和大量的黄单胞菌残菌。高黏度、高杂质和产品浓度低的特点给后提取过程造成极大的困难，使得去除杂质、脱水、产品精制在总成本中占了相当大的比例，后处理技术直接影响产品的产量。 　　酵液性质不稳定，易随时间发生变化，如受空气氧化、微生物污染等。分离过程很容易发生因pH、离子强度、温度等变化，造成产物的失活。根据上述特点，提纯分离过程的原则是：迅速加工，缩短停留时间，控制温度和pH，减少或避免与空气接触受污染的机会，优化提纯和分离工艺路线。 　　1. 黄原胶的提纯 　　发酵液中，黄原胶的含量很低，质量分数一般在2％～5％，还含有不溶性固体悬浮物、可溶性有机物和无机离子。精制和提纯黄原胶发酵液的常规方法是通过离心分离或抽滤，把不溶物质从发酵液中分离出来。由于发酵液黏度很大，必须先用水稀释，这样又增加了分离过程的成本。采用了两种新的提纯技术：硅藻土过滤法和酶降解法。 　　(1) 硅藻土过滤法。因为硅藻土有较小的颗粒度，表面呈多孔状，极易吸附溶液中较小的固体颗粒，经过滤处理，就能使菌体杂质与硅藻土一起除去。为验证其加入量对胶产量的影响，取5份等量的发酵液试样200mL，分别加入硅藻土(若产品的浓度较高，还需必要的稀释)1g、2g、3g、4g、5g快速搅拌1h，过滤，所得的处理液透明度明显提高，即硅藻土过滤法对去除菌体有显著效果。 　　 　　由表4可以看出，加入硅藻土处理后，所得处理液的黏度都比原发酵液的黏度小，说明硅藻土在吸附菌体残骸的同时也吸收了一部分黄原胶。随着加入量的增加，发酵液黏度出现了一个峰值，硅藻土使用的最佳质量浓度为15g／L。 　　(2) 酶降解法。酶降解法是一种新型的净化黄原胶发酵蔽的方法。首先热处理杀死发酵液中的菌体，然后用蛋白酶和溶菌酶分别处理。将含有黄原胶和细胞残体的发酵液在碱性条件下，升温55℃杀死菌体。然后调节pH值为弱碱性，加入碱性蛋白酶，搅拌处理。再把所得的处理液冷却到35℃，调节pH至7.0，加入溶菌酶，继续搅拌处理。黏度测定如表5。 　　使用蛋白酶和溶菌酶对发酵液进行降解，可除去菌体残骸等蛋白质不溶物。这种方法使所得的黄原胶具有较好的黏