慢性乙肝患者及HBV携带者CD8T细胞表面活化分子CD38与HLA―DR表达研究.docVIP

慢性乙肝患者及HBV携带者CD8T细胞表面活化分子CD38与HLA―DR表达研究 　　[摘要] 目的 研究慢性乙肝（CHB）患者阿德福韦酯治疗前后及HBV携带者CD8+T细胞表面活化分子CD38和HLA-DR表达情况，并探讨其与疾病进展的关系。 方法 收集32例经阿德福韦酯治疗的CHB患者，31例HBV携带者和28例正常对照，采集CHB患者治疗前后及HBV携带者和正常对照外周血。采用流式细胞术检测CD4+和CD8+T细胞数量和比例，以及CD8+CD38+和CD8+HLA-DR+T细胞比例，HBV DNA和生化由本院检验室检测。 结果 CHB患者治疗前CD8+CD38+T细胞比例显著高于HBV携带者和正常对照组，阿德福韦酯治疗后显著降低（P0.05）。HBV携带者CD8+CD38+T细胞比例高于正常对照组（P0.05）。CHB患者治疗前CD8+HLA-DR+T细胞比例显著高于正常对照组（P0.01），但与HBV携带者无明显差异，阿德福韦酯治疗后显著下降，仍高于正常水平（P0.05）。 结论 HBV感染可以引起CD8+T活化水平显著升高，阿德福韦酯抗病毒治疗能够降低CD8+T的活化。CD8+T活化水平是良好的HBV感染病情评价指标。 　　[关键词] HBV；慢性乙肝；免疫活化；CD38；HLA-DR 　　[中图分类号] R512.62 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）34-0014-04 　　乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是一种非细胞致病性病毒，HBV感染的临床结果主要依赖于宿主的免疫应答情况。研究发现T细胞免疫应答对HBV感染的进展十分重要[1]，其中CD8+T细胞免疫应答对控制病毒的复制起主要作用[2]。缺乏高强度的、特异性的免疫应答是导致慢性乙肝（chronic hepatitis B，CHB）病毒清除失败和疾病进展的主要原因[3，4]。研究外周血T细胞免疫活化状态对揭示CHB发病机制具有重要意义，尤其是CD8+T细胞的免疫活化。CD38分子是一种表达在早期T细胞表面的糖蛋白，成熟以后消失，但是T细胞活化后又重新出现[5]。作为T细胞免疫活化的标志，CD38在许多急性或慢性感染中均会表达升高，如人类免疫缺陷病毒（HIV）、EB病毒（EBV）等感染[5，6]。另外一个T细胞免疫活化的指标是人类白细胞抗原-DR（HLA-DR），在HIV的感染中可作为预测疾病进展的指标之一[7]。到目前为止，对HBV感染者及CHB患者T细胞免疫活化的研究较少。本文对慢性乙肝患者阿德福韦酯治疗前后及HBV携带者CD8+T细胞表面活化分子CD38和HLA-DR表达情况进行研究，并探讨其与病毒复制和疾病进展的关系。 　　1 对象与方法 　　1.1 研究对象 　　选取我院2010年6月～2011年6月接受阿德福韦酯抗病毒治疗的CHB者32例，其中男20例，女12例，平均年龄（50.2±22.4），平均病程（6.5±5.7）年。诊断标准符合2000年西安全国第10届病毒性肝炎会议所修订的《病毒性肝炎防治方案》诊断标准[3]，并排除其他病毒性肝炎、酒精、药物引起的肝损伤等。入组后接受阿德福韦酯10 mg/d 治疗12个月以上。另外，选取HBs抗原阳性的乙肝携带者31例，其中男22例，女9例，平均年龄（44.8±26.9）岁。以本院门诊体检者32人（均无特殊病史，体检无异常发现，anti-HBsAg（-），近2个月无感染史）作为正常对照组，男18例，女10例，平均年龄（42.1±20.6）岁。 　　1.2 样本的采集 　　采集慢性乙肝患者治疗前及治疗12个月后的外周血2 mL/人，以及HBV携带者和正常对照组血样2 mL/人，无菌EDTA抗凝管收集做流式细胞术检测，另外采集血样分别送化验室进行生化及HBVDNA等检测。 　　1.3 流式细胞术检测 　　荧光标记的单克隆抗体购自美国BD公司，CD4+和CD8+T细胞计数采用BD公司的细胞计数管，其余细胞比例检测采用普通流式管。每管加入50 μl血样及相应抗体，抗体组合如下：CD3-PE/CD4-FITC，CD3-PE/CD8-FITC，CD3-PE/CD8-FITC/CD38-APC，CD3-PE/CD8-FITC/HLA-DR-APC。标记好的血样室温避光孵育15 min，裂解红细胞后，采用BD公司FACScan四色流式细胞仪进行检测。 　　1.4 统计学分析 　　检测结果均以均数±标准差表示，应用SPSS 15.0软件进行数据分析，定量资料两组间数据比较采用t检验，多组间数据比较采用One-Way ANOVA（SNK法），相关性分析Person’s检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 CHB患