大熊猫粪便中纤维素降解菌的筛选及其产酶条件的优化-动物营养学报.PDF

动物营养学报２０１７，２９（８）：２８１７⁃２８２５ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１７．０８．０２６ 大熊猫粪便中纤维素降解菌的筛选及 其产酶条件的优化 １ ２ ∗ １ ３ ∗∗ 张　 智 　 尹文哲 　 雅　 男 　 马建章 （１．东北林业大学林学院，哈尔滨 １５００４０；２．哈尔滨医科大学附属第二医院，哈尔滨 １５００８６； ３．东北林业大学野生动物资源学院，哈尔滨 １５００４０） 摘　 要： 本试验旨在从大熊猫粪便中筛选出能够降解纤维素的菌株，并对该菌株进行鉴定和产 酶条件的优化。 利用羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ⁃Ｎａ）为唯一碳源的培养基，结合碘液染色法、滤纸 分解试验和纤维素酶活力测定，从大熊猫粪便中筛选得到１株纤维素降解菌ＤＬ。 结合形态学 观察、生理生化特征和 １６Ｓ ｒＤＮＡ 基因序列同源性分析，初步鉴定该菌株为Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏｏｋｉｉ ＬＺ０３３，它是一种产芽孢且好氧的革兰氏阳性菌。 为确定菌株ＤＬ 的最佳产酶条件，选取培养基 初始ｐＨ、培养温度、摇床转速以及装液量４ 个因素，在单因素试验结果的基础上，利用正交试 验，确定菌株 ＤＬ 的最佳产酶条件为培养基初始 ｐＨ 为６、培养温度为 ３５ ℃、摇床转速为 １２５ ｒ／ ｍｉｎ、２５０ ｍＬ 三角瓶装液量为１００ ｍＬ，在此条件下纤维素酶活力（以滤纸酶活力表示）为 １０２．３ Ｕ／ ｍＬ。 关键词： 大熊猫粪便；纤维素降解菌；产酶条件 中图分类号：Ｑ９３　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１７）０８⁃２８１７⁃０９ 　 　 大熊猫是我国特有的珍稀动物，１９８４ 年被列 发生。 因此，研究大熊猫肠道微生物区系尤为重 － ［１ ２］ 入世界１０种濒危物种之一 。 １０月龄的亚成年 要，对肠道疾病可起到一定的预防作用，从而改善 ［３］ 大熊猫食性转变为以竹子为主的高纤维食物 ， 大熊猫的健康水平，并且也是研制大熊猫微生态 每只成年大熊猫每 日进食竹子量可达 １２ ～ 制剂的基础。 虽然自然界中存在着许多能够降解 ［４］ ３８ ｋｇ ，大熊猫可利用竹子中８％的纤维素和 纤维素的微生物，但是大熊猫属于珍稀动物，更应 ［５］ ２７％的半纤维素 。 大熊猫的消化系统属于典型 该考虑喂养的安全性，从大熊猫粪便中筛选出的 ［６］ 的肉食性哺乳动物消化系统 ，２０１０ 年大熊猫的 纤维素降解菌比从其他环境中分离得到的微生物 基因组序列公布，从中可以找到编码与肉食性动 更适合作为大熊猫的微生态制剂或饲料添加剂。 物消化系统相关的酶的基因，但不存在任何纤维 　 　 近年来，大熊猫肠道微生物得到了国内外的 ［７］ ［１２］ ［１３］ 素酶的基因 ，因此大熊猫对纤维素的消化主要 广泛关注。 例如，张志和等 、Ｈｉｒａｙａｍａ 等 对 －