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谢立信临床和基础研究,如何良好互动 　　3月14日，正是草长莺飞、迎春花粲然报春之时。 　　在这大好春光中，业界专家学者云集于北京大学英杰交流中心，参加第六届中国眼科学基础研究大会暨研究生导师论坛。中国工程院院士、山东省眼科研究所所长谢立信教授在开幕发言中指出了眼表重建领域应用基础研究的发展方向。 　　眼表重建在中国：高难度挑战没商量？ 　　眼表（ocular surface）包括结膜上皮、角膜上皮及泪膜。眼表涉及的解剖部位除了角膜和结膜外，还有眼睑和泪腺组织。临床上，眼表疾病（ocular surface disease，OSD）主要是指角膜上皮和结膜上皮的病变。角膜上皮的完整是维持角膜正常功能和视觉质量的关键，其稳定性受益于角膜缘基底部干细胞不断地增殖分化和向心性移动。当各种因素导致角膜缘干细胞的破坏，会引起角膜缘干细胞的衰竭。 　　谢立信院士认为，眼表疾病是眼科界面临的棘手疾病之一，其中角膜缘干细胞缺乏是引起众多眼表疾病的主要原因之一。角膜缘干细胞缺乏常会引起角膜上皮缺损、角膜新生血管、角膜结膜化、角膜溃疡甚至自溶，严重者还会引起睑球粘连、结膜囊闭锁，不但影响外观，有的甚至会引起失明。近年来，由于角膜缘干细胞理论和组织工程技术的完善和发展，眼表疾病的治疗也有了较大进展。目前眼表重建手术是治疗眼表疾病的重要手段，而干细胞移植则是眼表重建手术中的关键，包括自体或同种异体角膜缘干细胞移植、体外培养角膜缘干细胞移植以及口腔黏膜上皮细胞的培养移植。 　　迄今为止，《新英格兰医学杂志》共报道了3篇对眼表重建研究领域十分重要的论文，都是关于干细胞移植重建眼表的临床研究。2000年，知名眼表疾病专家、台湾蔡瑞芳医师在《新英格兰医学杂志》发表文章，采用羊膜为载体构建培养的自体重组角膜上皮膜片，对6例单侧角膜缘干细胞缺乏患者进行了移植治疗，术后5例视力明显提高。2004年，日本大阪大学眼科学系主任Kohji Nishida教授等改变了载体，用温敏材料载体构建培养的自体重组口腔黏膜上皮膜片，对4例双侧角膜缘干细胞缺乏患者进行了移植治疗， 　　术后眼表稳定、角膜透明性和视力都有所改善。2010年，意大利Pellegrini教授在细胞培养的载体方面又进行了改进，把载体换成了纤维蛋白胶，构建了自体重组角膜上皮膜片，完成了112例角膜缘干细胞缺乏症患者的移植治疗，其中76.6%的患者角膜恢复了透明，平均随访2.91年，其中最长的为5年，部分病例是先改善眼表功能，然后再进行穿透角膜移植手术恢复视力。 　　从目前的报道来看，培养的干细胞移植成功率多在75%左右，但决定成功率的关键是培养的重组上皮膜片中含有一定比例的干细胞，阻挡了新生血管向角膜的生长。在此情况下再做穿透角膜移植术，成功率就会较高。而且，他们选取的病例损伤程度较轻，基本都局限在角膜部位，结膜和其他眼表功能相对正常，没有明显的角膜基质和角膜内皮损害，血管膜切除方便；此外，多采用患者自体角膜缘干细胞移植，涉及到的免疫排斥反应问题也比较少。 　　“国内几个中心开展的眼表重建手术大多是参考国外的最先进技术，但我国眼表重建手术面临的临床科学问题与发达国家明显不同。患者病情复杂，不但有角膜缘干细胞的缺乏，且结膜和眼睑都有不同程度的损伤，必须先重建结膜囊，恢复眼表的功能，再进行角膜功能重建，板层角膜移植或穿透角膜移植手术进行复明；此外，患者多为双眼烧伤，没有自体角膜缘干细胞可用，这就要求我们用细胞生物学、分子生物学和免疫学的基础研究来解决这些临床问题。 　　既然临床上需要大的细胞膜片才能重建结膜囊，那么干细胞的体外大量扩增就成为了关键问题。有人说，这个细胞膜片可来自患者自体口腔黏膜，但重建结膜囊采用培养的口腔粘膜移植后近期效果很好，2年后，仍有新生血管长入，因为此类培养的上皮组织缺少抗新生血管的因子。这就需要改进干细胞培养的方法，当然目前也有很多细胞生物学和分子生物学的方法，但效率还比较低。我们科研团队的研究人员采用羊膜作为载体，探索通过加入一种称为“Rho蛋白激酶抑制剂”的小分子化合物Y-27632，来实现角膜缘干细胞的大量扩增，构建重组角膜上皮膜片，发现其中干细胞的数量和比例均明显增加。 　　角膜缘干细胞扩增，要突破更要安全 　　谢立信院士还介绍说，我们科研团队扩增培养构建出角膜缘上皮细胞膜片后，首先考虑的不是马上应用于临床，而要想到其在临床应用上的安全性。此前，我们已取得卫生行政部门的临床应用批件，可开展组织工程化角结膜上皮移植治疗技术临床应用。 　　目前小分子化合物Y-27632的分子机制明确，已有不少临床应用的报道证实其使用是安全的，但我们发现其主要功能是提高干细胞的抗氧化能力。既然要移植大的细胞膜片，就要尽量提高其存活能力，使其能在患者眼表很好地存活。首先，我们尽量