肠道细菌通过调控结直肠癌不同亚群促进成瘤-外科学专业论文.docxVIP

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肠道细菌通过调控结直肠癌不同亚群促进成瘤-外科学专业论文

独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他个 人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体, 均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名: 日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本 人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索, 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密□, 在 年解密后适用本授权书。 本论文属于  不保密□。 (请在以上方框内打“√”) 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期: 年 月 日 日期: 年 月 日 目 录 摘 要1 Abstract 3 正 文6 前 言6 材料和方法 11 结果18 结 论31 讨 论32 参考文献34 综 述35 参考文献43 致 谢47 华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 1 PAGE 1 肠道细菌通过调控肿瘤细胞不同亚群调节结直肠癌成瘤能力 摘 要 【目的】 研究肠道菌群在结直肠癌进展中的作用及其机制。 【方法】 在华中科技大学同济医学院附属同济医院胃肠外科的结直肠癌确诊患者选取尚 未进行手术的病人,要求患者 1 个月内饮食无太大变化,前一个月内未服用抗生素和 其他可能影响肠道微生物的药物和食物,并用同样的原则选取相应的健康志愿者。用 无菌采样用品采样,扩增细菌并提取细菌代谢产物,根据代谢产物来源分为结直肠癌 组和健康志愿者组。用细菌代谢产物处理 SW620、LoVo 和 HT-29 细胞,采用克隆形 成实验检测肿瘤的增殖能力,用成球试验检测各个细胞系的自我更新能力。用流式分 选的方法获得 CD133 不同亚群的细胞,采用克隆形成实验检测肿瘤细胞 CD133 亚群 的增殖能力,用成球试验检测 CD133 不同亚群的自我更新能力,将分选后的细胞注 射到免疫缺陷的 NOD/SCID 小鼠皮下检测其成瘤能力,并用细菌代谢产物处理各组观 察细菌代谢产物对细胞的增殖、干性和成瘤能力的影响。用焦磷酸测序检测健康志愿 者和结直肠癌患者粪便菌群的组成。同时进一步研究细菌代谢产物在肿瘤发展导致的 相关的基因的变化,探讨其细胞、分子水平的机制。 【结果】 结直肠癌组代谢产物处理后,SW620、LoVo、HT-29 的细胞球体形成率、克隆形 成率较健康志愿者组明显升高(P<0.05);用流式细胞仪分选 CD133high 和 CD133low 结直肠癌细胞,流式细胞仪检测分选后纯度。结直肠癌病人粪便的代谢产物的加入 SW620、LoVo、HT-29 CD133high 细胞后,结直肠癌患者组与健康志愿者组成球率相比, 细胞球体形成率有升高的趋势(P>0.05),但是在 CD133low 组其球体形成率均明显 升高,并且差异具有统计学意义(P<0.05);CD133high 细胞克隆形成率结直肠癌组 克隆形成率与健康志愿者组比增加,差异无统计学意义 CD133low 的 SW620、LoVo、 HT-29 细胞克隆形成率,结直肠癌组克隆形成率高于健康志愿者组,差异具有统计学 差异(P<0.05)。体内成瘤实验结果显示,SW620 细胞成瘤率,在健康志愿者 HC1 组的为 60%(6/10),结肠癌患者 P5 中为 100%(10/10),F12 空白对照组为 40%(4/10), P5vsF12 差异有统计学意义(P<0.05)。分选后 LoVo CD133high 各组间差异无显著差 别,CD133low 各组 HC1 组,结肠癌患者 P5 组和空白对照组分别为 5/10、8/10 和 10/10, HC1 vs. F12(P<0.05)并且以健康志愿者组抑制成瘤能力最强。焦磷酸测序实验结果显 示结直肠癌病人粪便同健康人粪便标本比较在螺旋杆菌属(Helicobacter)、脱硫弧菌 属(Desulfomicrobiu)、希瓦氏菌属(Shewanella)种细菌上含量多,而在罗氏菌属 (Roseburia)、梭菌属(Clostridium)等含量较健康人粪便标本少。 【结论】 结直肠癌患者肠道细菌可以通过其分泌产物,增强 CSCs 干性和促进 non-CSCs 去分化 为 CSCs,从而促进结直肠癌的进展。 【关键词】 肠道细菌; 结肠癌;癌干细胞; CD133;细胞亚群 Gut bacteria mediate tumorigenic capacity through regulating

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