肠道菌群及肠道炎症在OLETF大鼠糖尿病发病中的动态变化-临床医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得 的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即： 学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或 机构送交论文，并编入有关数据库。 本论文属于 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 不保密 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 目的： 中文摘要 近些年越来越多的研究显示，2型糖尿病的发生发展与肠道细菌的变化密切 相关，肠道菌群结构的改变通过诱导肠壁炎症反应，损伤肠粘膜屏障完整性，进 而造成体内慢性炎症反应，参与胰岛素抵抗及2型糖尿病发生发展的整个过程。 本研究通过分析自发性2型糖尿病大鼠——OLETF大鼠从正常血糖阶段、正常血 糖-高胰岛素血症阶段、糖耐量下降阶段至糖尿病阶段的整个发病过程中肠道菌 群结构、肠道及血清细菌脂多糖水平、肠道炎症反应、肠道组织病理以及肠粘膜 渗漏性的动态变化，以探讨肠道菌群紊乱在2型糖尿病发生发展中的作用及潜在 机制。 方法： 选取自发2型糖尿病大鼠OLETF大鼠作为模型组大鼠，观察其病程进展的不 同阶段（正常血糖阶段、正常血糖-高胰岛素血症阶段、糖耐量下降阶段、糖尿 病阶段），同时选取与OLETF大鼠相同遗传背景的LETO大鼠作为正常对照组大 鼠，对各组及不同病程阶段的大鼠留取血标本及粪便标本，同时处死对应时期的 相应数量的大鼠取肠道组织标本。生化法检测大鼠基本生化指标；运用16S rDNA 焦磷酸测序技术进行肠道菌群基因测序，以鉴别菌群的多样性以及在不同分类水 平上的丰度；ELISA法检测血清及粪便脂多糖（LPS）水平，同时运用该方法检 测血清中的肠道渗漏指标连蛋白（zonulin）、二胺氧化酶（DAO）；通过光镜对 肠粘膜上皮绒毛、完整性等病理改变进行观察，通过透射电镜对肠粘膜上皮紧密 连接、中间连接及桥粒连接等细微结构的改变进行观察；运用Western blot技术对 肠道组织局部炎症指标TLR4及NFκb进行检测；分析以上各个指标在正常对照组 （NC组）、OLETF大鼠正常血糖阶段（NGT组）、正常血糖-高胰岛素血症阶段（HI 组）、糖耐量减低阶段（IGT组）及糖尿病阶段（DM组）的动态变化。 结果： （1）LETO大鼠（也即正常对照组大鼠）与OLETF大鼠基线资料（也即OLETF 大鼠正常血糖阶段）相比，细菌门类构成上差异不明显，但在排名前十位的细菌 种属中，OLETF大鼠正常血糖阶段的乳酸菌属及Phascholarctobacterium菌属的相 对丰度较LETO大鼠明显偏低（P 0.05）；而血清及粪便LPS水平两组无明显差异； 肠组织局部炎症标志物TLR4和NFκB的表达量两组间无明显差异；血清中的肠道 渗漏标志物zonulin和DAO两组间也无明显差异。 （2）OLETF大鼠在正常血糖阶段、正常血糖-高胰岛素血症阶段、糖耐量减低阶 段、糖尿病阶段的肠道微生物丰富度及物种总数具有明显差异，正常血糖-高胰 I 岛素血症阶段开始，较正常血糖阶段肠道微生物的物种总数就明显下降，而在正 常血糖-高胰岛素血症阶段、糖耐量降低阶段及糖尿病阶段的动态发病过程中， 肠道微生物的物种总数逐渐升高。说明在OLETF大鼠糖尿病发生之前，肠道菌群 的结构就已经发生变化，并且在糖尿病发生发展的过程中，肠道菌群结构的变化 参与其中； （3）肠道菌群在门水平上的检测结果显示，OLETF大鼠在正常血糖阶段、正常 血糖-高胰岛素血症阶段、糖耐量降低阶段及糖尿病阶段，各组的菌群丰度排名 前三位的细菌门类均为：硬壁菌门，拟杆菌门，变形菌门，但是各组间这三个主 要门类的细菌丰度的比例差异较大； （4）我们以拟杆菌门与变形菌门的总和与硬壁菌门的比值作为评价革兰氏染色 阴性细菌与革兰氏染色阳性细菌的比值，结果现实：OLETF大鼠正常血糖阶段肠 道革兰氏染色阴性的细菌与革兰氏染色阳性细菌的比例为1.10，而正常血糖-高胰 岛素血症阶段为2.27、糖耐量降低阶段为1.18，糖尿病阶段为2.00，均表现为革 兰氏染色阴性细菌的比例增加，而革兰氏染色阳性细菌比例减少。 （5）血清及粪便脂多糖（LPS）水平在OLETF大鼠