二苯乙烯苷对炎症性肠病的作用诱导PPARγ和抑制NFκB炎症通路-药理学专业论文.docxVIP

中文摘要 第一部分 THSG 的含量测定及初步探讨其时效及量效关系 背景和目的：何首乌(Polygonum multiflorum Thunb , PM)作为传统的中草药，用于 滋补及抗衰老已上千年，同样也用于润肠通便、消痈和乌须发等多个方面。二苯乙烯 苷（2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-?-D-glucoside，THSG)，是从 PM 中提取出的具有 多酚类结构的水溶性活性成分，已证实其具有抗氧化和抗炎的作用。本文第一部分旨 在测定从 PM 中提取的 THSG 的含量并就其抗结肠炎的时效和量效关系做初步研究。 方法：采用高效液相色谱（HPLC）测定 THSG 的含量，采用 HE 染色观察小鼠肠道 粘膜的病理改变，运用生化的方法检测髓过氧化物酶（ MPO）及丙二醛（MDA）的含量。 结果：经筛选色谱条件以 Hypersil ODS-C18 (5μm，4.6× 250 mm)为固定相，甲醇- 水（4：6）为流动相，检测波长以 310 nm 为最佳。样品在 4.224~132 μ g/mL 范围内线 性关系良好（n=3），回归方程为：Y=19087X-19466，r=0.970。结果表明自制 THSG 含 量高达 99.90%。在整体水平上建立乙酸诱导的结肠炎模型后，连续给药 5、7、10 天 后，与正常组小鼠比较，模型组小鼠体重明显降低。THSG (10、30、60 mg/kg)能剂量 依赖性改善小鼠体重的降低，60 和 120 mg/kg THS G 均能明显改善小鼠体重的降低， 但两者之间比较，没有统计学差异。不同剂量的 THSG(10、30、60 和 120 mg/kg)给药 5、7、10 天后，HE 染色显示：与乙酸模型组比较，THSG 明显减少炎性细胞浸润，降 低粘膜及粘膜下水肿，改善上皮细胞的坏死脱落及溃疡形成。连续给药 5、7、10 天后， THSG 10、 30、60 mg/kg 能剂量依赖性减少 MPO 的含量； 60 和 120 mg/kg THSG 均 能降低 MPO 的含量，但两者之间比较，没有显著性差异。THSG 10、30、60 mg/kg 能 剂量依赖性减少 MDA 的含量； 60 和 120 mg/kg THSG 均能降低 MDA 的含量，但两 者之间比较，没有显著性差异。 结论：含量测定结果表明自制 THSG 含量高达 99.90%，达到单体物质质量要求。 在 10~60 mg/kg 的范围内以上效应存在剂量依赖关系，而在 60~120 mg/kg 的范围内， 其作用没有显著性差异，可能是到达了药效的平台期。 关键词：二苯乙烯苷，炎症性肠病，MPO，MDA 第二部分 THSG 对炎症性肠病治疗作用及其机制研究 背景与目的：炎症性肠病（ inflammatory bowel disease，IBD）在降低患者生活质 量的同时，也给社会带来极大的经济压力。研究表明，IBD 的发生与过氧化物酶体增 生物活化受体-?（ peroxisome proliferator-activated receptor-?，PPAR-?）的缺陷密切相 关。在炎症级联反应过程中，核转录因子-?B （nuclear factor-?B，NF-?B）被激活， 诱导肿瘤坏死因子-a（tumor necrosis factor-a，TNF-a）、白细胞介素-6（interleukin-6, IL-6）、环氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）等炎性介质的表达增加，从而导致活 性氧/氮族（reactive oxygen/nitrogen species，ROS/RNS）的过度产生，进一步造成组 织损伤，并形成完整的炎症与氧化应激反应的正反馈通路。二苯乙烯苷 （2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-?-D-glucoside， THSG)，是从何首乌（Polygonum multiflorum Thunb， PM)中提取出的具有多酚类结构的水溶性活性成分，已证实其具 有抗氧化和抗炎的作用。本课题组已经证实 THSG 对炎症性肠病的治疗作用与降低 ROS/RNS 水平、下调诱导性一氧化氮合酶（induced metric oxide synthase, iNOS）有关。 本研究旨在考察二苯乙烯苷（THSG）对炎症性肠病（ inflammation bowel disease，IBD） 的作用及其与 PPAR-? 和 NF-?B 介导的炎症信号通路的关系。 方法：在整体水平上建立乙酸诱导的结肠炎模型，采用 RT-PCR 技术测定 PPAR-? 在 mRNA 水平的表达。采用免疫印迹技术（western blotting）技术检测 NF-?B、