普通裂褶菌形态学观察及小鼠体内药物敏感性实验-研究.pdfVIP

中文摘要 1．3光镜观察取其菌丝标本置于载玻片上，lO％KoH溶液溶解后，盖 上盖玻片，光镜下观察菌丝形态。 2小鼠体内药敏试验 2．1系统性普通裂褶菌感染动物模型的制作将我科保存菌株复苏，转种 于SDA培养基上37℃培养7天。用无菌生理盐水制备成菌悬液，接种 于小鼠体内使其感染，解剖小鼠分离出恢复毒力的菌株。分离出的菌株 用无菌生理盐水制成菌悬液，通过腹腔注射途径接种于应用环磷酰胺免 疫抑制的小鼠。 2．2给药方法接种后第二天开始给药，氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬的 次，连续5天。 2．3生存观察连续观察各组小鼠感染该菌后21天内的自然死亡情况，记 录死亡日期和死亡只数。 2．4组织真菌逆培养无菌条件下将各脏器用组织研磨器研碎后挑取少许 分别接种于含氯霉素的沙堡氏琼脂平皿培养基中，37℃恒温箱培养，统 计各组小鼠内脏逆培养阳性数。培养阳性的菌落分别移种至平皿培养基 及小培养的培养基上培养，观察其菌落形态以及菌丝的形态。 2．5肝脏真菌载菌量测定无菌条件下取各组死亡小鼠的肝脏，匀浆后进 行组织的真菌平皿培养，计算肝脏的真菌载菌量。 结果： 生长，1周后菌落直径约7cm，菌落中央形成同心状环纹区，菌丝白 色，棉毛至羊毛状，浓密厚重，堆积高出于培养基表面，菌落表面出现 微黄色液滴渗出物，培养基背面初为白色，其后变为淡黄色。释放出一 种类似沼气的难闻的气味，在光照与黑暗交替的环境下，27℃和37℃恒 温箱培养4周未见担子果形成。 2光镜下观察可见发达的分支分隔菌丝，菌丝直径差别较大，在分隔 处可见闭锁联合。在菌丝表面上常常发现侧生钉状突起，未见担子及担 孢子形成。 3小鼠感染后生存状况 小鼠接种茵悬液后，进食明显减少，并逐渐消 瘦，活动减少，精神差，给予药物治疗后，氟康唑组和伊曲康唑组小鼠 中文摘要 进食增加，精神状况改善，而生理盐水对照组和特比萘芬组小鼠未见明 显变化。 4感染后死亡情况接种后第3天开始出现自然死亡，生理盐水对照组第 6天达死亡高峰，第15天止，死亡22只；氟康唑组第7天达死亡高峰， 第11天止，死亡9只；伊曲康唑组第7天达死亡高峰，第lO天止，死 亡8只；特比萘芬组第6．7天为死亡高峰，第14天小鼠不再死亡，死亡 20只，与生理盐水对照组相比，21天观察期内生存率和中位生存天数 有着显著性差异(尸O．05)。 5脏器的大体改变各组实验小鼠内脏均有不同程度的病理变化，部分小 鼠脏器表面可见白色化脓性病灶，以肝脏多见。 6脏器组织病理HE染色可见大量炎细胞浸润形成的化脓性肉芽肿病 变，PAS染色除肾脏外，均可在组织中看到紫红色的分支菌丝。 7组织真菌逆培养部分小鼠内脏组织培养3天后可见白色菌落生长，其 菌落形态及镜下结构与实验菌株一致。肝、脾逆培养阳性率：氟康唑组 和伊曲康唑组较生理盐水对照组和特比萘芬组低，有显著性差异，氟康 唑组和伊曲康唑组、生理盐水对照组和特比萘芬组之间无显著性差异。 肺脏逆培养阳性率：氟康唑组与生理盐水对照组和特比萘芬组之间差异 有统计学意义；各组小鼠心、肾逆培养阳性率较低，无显著性差异。 8肝脏组织载菌量氟康唑组、伊曲康唑组、特比萘芬组肝脏组织载菌量 较生理盐水对照组明显减少，氟康唑组与伊曲康唑组、特比萘芬组与生 理盐水对照组之间肝脏组织载菌量无显著变化，氟康唑组与特比萘芬 组、伊曲康唑组与特比萘芬组之间肝脏组织载菌有显著差异。 结论： 1氟康唑和伊曲康唑在小鼠体内均有较好的抗普通裂褶菌活性，显著提 高了肝、脾组织的真菌清除率，降低了肝脏组织载菌量，延长了小鼠生 存时间，提高了小鼠的生存率，而特比萘芬效果较差。 2氟康唑和伊曲康唑在对小鼠生存率、生存时间、组织真菌清除率、肝 脏组织载菌量方面的影响无显著性差异。 关键词：普通裂褶菌；形态学：动物实验：药敏；实验研究 英文摘要 researchonthe of Experiment morphology andits 办龙印局吵跏朋cD肌肌砧刀口 sensitivi锣 to in-VivO