肥大细胞及其蛋白酶在药物过敏性休克法医诊断中的应用研究-法医学专业论文.docxVIP

山 山西医科大学博士学位论文 HYPERLINK \l _bookmark0 致 谢 81 HYPERLINK \l _bookmark1 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果 82 HYPERLINK \l _bookmark2 个人简历 83 肥大细胞及其蛋白酶在药物过敏性休克法医诊断中的 应用研究 中文摘要 目的： 测定药物过敏性休克死亡者右心血、心包液、胸腔液及腹腔液中肥大细胞羧肽酶 A3、类胰蛋白酶及类糜蛋白酶的含量；观察类胰蛋白酶、类糜蛋白酶在药物过敏性 休克死亡者心、肺、咽喉、胃及空肠组织中的表达；试图为药物过敏性休克死亡的法 医学诊断提供客观的实验室诊断指标及检测方法。 方法： 实验设立药物过敏性休克死亡组、冠心病猝死组及对照组三组。药物过敏性休克 死亡组 20 例，死因确诊为药物过敏性休克死亡，并排除其生前存在冠心病、肥大细 胞增多症、颅脑损伤及吸食毒品；过敏性休克的原因分别为静脉滴注青霉素 2 例、头 孢曲松钠 6 例、左氧氟沙星 5 例、盐酸林可霉素 1 例、赖氨匹林 1 例、洛美沙星 1 例、中药清开灵 1 例，中药双黄连 1 例，口服布洛芬 1 例，水合氯醛灌肠 1 例；20 例中 5 例在死后 48h 内进行了尸体解剖检验，14 例在死后 7d 内进行了尸体解剖检验， 1 例在死后 15d 尸体解剖。冠心病猝死组 20 例，死因确诊为冠状动脉性猝死，并排 除生前为过敏体质者、肥大细胞增多症患者及毒品吸食者，其中 10 例在死后 48h 内 进行了尸体解剖检验，10 例在死后 7d 内进行了尸体解剖检验。对照组 20 例，排除 过敏性休克、颅脑损伤、冠心病及吸食毒品导致的死亡，并排除生前为过敏体质者及 肥大细胞增多症患者，20 例均在死亡后 48h 内做了系统尸体解剖。 以上实验组在进行尸体解剖检验时均采取尸体右心血、心包液、胸腔液和腹腔液， 离心后取上清，-80℃冷冻保存，以备荧光酶联免疫（FEIA）和酶联免疫吸附（ELISA） 检测；提取心脏、肺脏、咽喉、胃及空肠组织，甲醛固定并石蜡包埋，以备进行免疫 荧光染色；提取心脏、肺脏、咽喉、胃及空肠组织并进行蛋白提取,以备进行 western blot 检测。 I （1）ELISA 双抗体夹心法测定右心血、心包液、胸腔液及腹腔液中肥大细胞羧 肽酶 A3 和类糜蛋白酶的含量；（2）FEIA 法测定右心血、心包液、胸腔液及腹腔液 中肥大细胞类胰蛋白酶含量；（3）免疫荧光染色法对心、肺、咽喉、胃和空肠组织中 类胰蛋白酶和类糜蛋白酶进行染色，Olympus BX61 荧光显微镜观察并进行图像采集， Image-pro plus6.2 软件进行图像分析；（4）western blot 法检测心、肺、咽、胃和空肠 器组织中类胰蛋白酶含量；（5）应用 3 种甲苯胺蓝异染肥大细胞的方法，观察药物过 敏性休克死亡组肥大细胞脱颗粒现象；（6）SPSS17.0 统计软件对实验数据进行统计 分析，组间差异采用单因素方差分析（ANOVA）进行检验，两两检验采用 LSD 法进 行校正。 结果： 药物过敏性休克死亡组右心血、心包液、胸腔液及腹腔液肥大细胞羧肽酶 A3 含 量分别为 10.13±2.11ng/ml、4.34±1.61ng/ml、4.60±1.81ng/ml、4.49±1.21ng/ml，类 胰蛋白酶含量分别为 41.57±5.48ug/l、28.96±4.82ug/l、29.71±4.90ug/l、22.62± 4.10ug/l，类糜蛋白酶含量分别为 7.85±1.46ng/ml、7.31±1.37ng/ml、7.32±1.79ng/ml、 7.29±1.53ng/ml。 冠心病猝死组右心血、心包液、胸腔液及腹腔液肥大细胞羧肽酶 A3 含量分别为 4.51±0.91ng/ml、2.07±0.41ng/ml、1.85±0.61ng/ml、1.89±0.66ng/ml， 类胰蛋白酶含量分别为 16.42±2.91ug/l、11.55±2.41ug/l、12.74±2.84ug/l、10.66± 2.76ug/l，类糜蛋白酶含量分别为 3.02±0.86ng/ml、2.80±0.67ng/ml、2.82±0.76ng/ml、 2.79±0.76ng/ml。 对照组右心血、心包液、胸腔液及腹腔液肥大细胞羧肽酶 A3 含量 分别为 3.18±1.30ng/ml、1.36±0.48ng/ml、1.26±0.36ng/ml、1.59±0.51ng/ml，类胰 蛋白酶含量分别为 4.86±0.86ug/l、 4.64±0.95ug/l、3.30±0.84ug/l、3.11±0.96ug/l， 类糜蛋白酶含量为 1.22 ± 0.55ng/ml 、