茶尺蠖核型多角体病毒多克隆抗体制备及检测应用.docVIP

茶尺蠖核型多角体病毒多克隆抗体制备及检测应用 　　摘要：以纯化的茶尺蠖核型多角体病毒（Ｅｃｔｒｏｐｉｓ ｏｂｌｉｑｕａ ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ，ＥｃｏｂＮＰＶ）作为抗原免疫大耳白兔，获得多克隆抗体，Ｉｎｄｉｒｅｃｔ－ＥＬＩＳＡ效价为１∶５１ ２００；工作浓度分别为ＥｃｏｂＮＰＶ １∶１ ６００、兔抗血清１∶３ ２００。用所制备的多克隆抗体对提纯的多角体进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析表明制得的抗体对茶尺蠖核型多角体病毒有良好的特异性。应用于不同来源茶园昆虫多角体病毒分离株的检测，取得了理想的检测效果。 　　关键词：茶尺蠖核型多角体病毒；纯化；抗体制备；检测 　　中图分类号：Ｑ９３－３３１；Ｓ４７６＋．１１ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）02－0298-04 　　 　　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ aｇａｉｎｓｔ Ｅｃｔｒｏｐｉｓ Oｂｌｉｑｕａ Nｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ 　　ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ Ｖｉｒｕｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ 　　 　　ＴＡＮ Ｒｏｎｇ－ｒｏｎｇ１，２，ＬＩＵ Ｍｉｎｇ－ｙａｎ１，２，ＧＯＮＧ Ｚｉ－ｍｉｎｇ１，２，ＨONG Ｎｉ３，ＭＡＯ Ｙｉｎｇ－ｘｉｎ１，２ 　　（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｆｒｕｉｔ ａｎｄ Ｔｅａ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗｕｈａｎ ４３０２０９，Ｃｈｉｎａ；； 　　２． Ｈｕｂｅｉ Ｔｅａ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｗｕｈａｎ ４３０２０９，Ｃｈｉｎａ； 　　３． Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｄｏｏｒ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｖｉｒｕｓ－ｆｒｅｅ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｏｆ Ｆｒｕｉｔ Ｃｒｏｐｓ， Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ，４３００７０，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ aｎｔｉｂｏｄｙ ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｉｚｉｎｇ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｉｔｈ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ＥｃｏｂＮＰＶ； Aｎｄ ｉｔｓ ｔｉｔｅｒ ａｎｄ ｗｏｒｋｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗas １∶５１ ２００， １∶１ ６００ ｉｎ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ． Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉｓｅｒｕｍ ｗａｓ １∶３ ２００． Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ａｎｔｉｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｉｎ Ｅｃｔｒｏｐｉｓ ｏｂｌｉｑｕａ Ｐｒｏｕｔ ｓａｍｐｌｅｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｏｕｒｃｅｓ． Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ rｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ was ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔｏ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ． Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ａｎｔｉｓｅｒｕｍ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＥｃｏｂＮＰＶ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｅａ ｇａｒｄｅｎｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＥｃｏｂＮＰＶ ｑｕｉｃｋｌｙ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｅｃｔｒｏｐｉｓ ｏｂｌｉｑｕａ ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ； ｐｕｒｉｆｉｅｄ； ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ； ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ 　　有关利用酶联免疫技术检测昆虫病毒的方法，国内外已有相关文献报道。如Ｃｒｏｏｋ等［1］利用3种不同类型的ＥＬＩＳＡ法检测杆状病毒；张光裕等［2］等用单克隆抗体结合酶联免疫吸附试验检测云杉卷叶蛾幼虫体内的核型多角体病毒；陈建国等［3］应用菜粉蝶颗粒体病毒单克隆抗体对不同株系病毒进行抗原分析；石正丽等［4］测定了茶毛虫核型多角体病毒的血清学特性；黄亚欣等［5］利用ＥＬＩＳＡ对斜纹夜蛾核型多角体病毒进行了定量检测分析。茶尺蠖核型多角体病毒（Ｅｃｔｒｏｐｉｓ ｏｂｌｉｑｕａ ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ，ＥｃｏｂＮＰＶ）是一种环状闭合双链ＤＮＡ病毒，该病毒属于杆状病毒科核型多角体病毒属，大量研究表明该病毒对宿主昆虫有较高的致病性，对人、畜安全，亦不污染自然环境［6］。该病毒１９８７年在湖北省农业科学院果树茶叶研究所茶园分离得到