姜黄素及其衍生物C086体外抗慢性粒细胞白血病作用及其机制分析-药理学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文名称 Cur Curcumin 姜黄素 CML Chronic Myelogenous Leukemia 慢性粒细胞白血病 IC50 PBS 50% Inhibition Concentration Phosphate Buffer Saline 50%抑制浓度 磷酸盐缓冲液 DMSO Dimethylsulfoxide 二甲基亚砜 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 PVDF poly vinylidene fluoride HYPERLINK /view/710904.htm 聚偏氟乙烯 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 UV Ultraviolet 紫外 IM imatinib 依马替尼 FITC fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 PI Propidium Iodide 碘化丙啶 HSC Hemopoietic Stem cell 人造血干细胞 CFU clony forming units 集落形成数 LTC-IC Long term culture-initiating cell 长期培养启动细胞 MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetraz 3（- 4,5-二甲基噻唑-2）-2,5- olium bromide SDS sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis CFSE 5-or6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)-3,6-O,O -diacetylfluorescein 二苯基四氮唑溴盐 十二烷基磺酸钠聚丙烯酰 胺电泳 羧基荧光素二醋酸盐琥珀 酰亚胺酯 EDTA Ethylene diaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸 中文摘要： 姜黄素及其衍生物 C086 体外抗 CML 作用及其机制研究 目的：研究姜黄素及其衍生物 C086 在体外的抗依马替尼敏感和耐药慢性粒细 胞白血病细胞的作用，探讨药物对白血病细胞的凋亡诱导作用与线粒体凋亡途径 的关系 方法：（1）四甲基偶氮唑蓝(MTT)法体外检测 C086 对白血病细胞 K562 及耐 IM 的白血病细胞 K562/G01 细胞的增殖抑制作用。（2）通过 AnnexinV-FITC/PI 双染法检测 C086 及 Cur 对白血病细胞的凋亡作用。（3）采用 JC-1 染色法检测 C086 及 Cur 对白血病细胞作用后，对线粒体膜电位的影响。（4）通过 PI 染色 法测定细胞周期改变。（5）对细胞进行 CFSE 染色后，测定 C086 及 Cur 对细胞 的分裂增殖的抑制作用。（6）台盼蓝排染法测定 C086 及 Cur 对白血病患者 CD34+ 细胞的杀伤作用。（7）集落形成法测定 C086 及 Cur 对白血病患者 CD34+细胞 集落形成能力的抑制作用。（8）通过长期培养体系检测 C086 及 Cur 对白血病 患者长期启动细胞（LTC-IC）的抑制作用。（9）应用蛋白免疫印迹法检测线粒 体凋亡相关蛋白的表达。 结果：（1）C086 呈剂量依赖性的抑制 K562 和 K562/G01 细胞的增殖，24h 的 IC50 分别为 3.19μmol·L-1 和 1.72μmol·L-1 。（2）C086 及 Cur 可诱导 K562 和 K562/G01 细胞凋亡，且随着药物浓度的增加，细胞凋亡率增加。（3）C086 及 Cur 作用白血病细胞后，线粒体膜电位发生明显的变化，线粒体膜电位耗散程度 增加。（4）C086 及 Cur 可以显著影响细胞周期进程，阻滞白血病细胞周期于 G2/M 期。（5）C086 可明显抑制白血病细胞的分裂增殖能力。（6）C086 及 Cur 均表现 出对白血病患者的 CD34+细胞的抑制作用。（7）C086 及 Cur 对白血病患者 CD34+ 祖/干细胞的集落形成能力有明显的抑制作用。（8）C086 可明显的抑制 CML 患 者白血病干细胞的自我更新能力，有效抑制 LTC-IC。（9）C086 及 Cur 通过线 粒体 caspase-9/caspase-3 途径诱导白血病细胞凋亡。 结论：姜黄素及其衍生物 C086 可通过线粒体 caspase-9/caspase-3 途径诱导 伊马替尼敏感和耐药 CML 细胞凋亡，抑制不同分化阶段白血病细胞增殖。 关键词：姜黄素；凋亡； 线粒体；半胱氨酸蛋白酶；白血病干细胞, 长期培养 启动