豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI）基因转化花椰菜的分析-蔬菜学专业论文.docxVIP

摘要_上～～差于坠t基因转化花椰菜已有不少报道，但很少有将CpTI基因转化花椰菜 摘要 _上～～差于坠t基因转化花椰菜已有不少报道，但很少有将CpTI基因转化花椰菜 的研究报道。前实验以花椰菜为试材，通过植物基因工程获得抗虫转基因植株， 主要的工作和结果如下： 1．花椰菜高频再生体系的建立 f以4—7天花椰菜的子叶，下胚轴为外植体，MS为基本培养基，通过加入不 同浓度和不同组合的6-BA，NAA，筛选出外植体不定芽分化的最适培养基 (MS+BA2．Omg／L+NAAO．2mg／L)，并比较了两种不同外植体的分化能力，下胚轴的 分化频率高于子叶。，一∥7。 2．花椰菜外植体对卡那霉素(Kan)的敏感性分析 厂在分化培养基中加入浓度为lOmg／L的Kan时，外植体形成愈伤组织明显受 到抑制，形成的愈伤组织也部分死亡：当Kan加入浓度为15mg／L时，外植体及 形成的愈伤组织全部逐渐白化死亡；当浓度为30mg／L时，外植体未形成愈伤组 织就白化死亡，因此以15mg／L Kan作为外植体的筛选压一卜一：；r～ 3．花椰菜外植体高频转化体系的建立 ，在最适培养基上试验了预培养时间、感菌时间、共培养时间等转化条件，建 立于花椰菜外植体的高频转化体系：4—7天的子叶和下胚轴外植体，再生培养基 上预培养3天，在用YEB液体培养基稀释10倍的菌液中感菌30一60秒，共培养 2天后，立即转入含Carb的脱菌培养基(MS+6一BA2．0mg／L+NAA0．2mg／L+ Carb500mg／L)中培养7-10天抑制农杆菌的生长，然后转入含Kan的筛选培养基 (MS+6-BA 2．0mg／L+NAAO．2mg／L+Kanl5mg／L+Carb300mg／L)中筛选抗性愈伤 组织和抗性芽，每两周换一次培养基。逐渐降低Carb的浓度。经多次继代培养， 淘汰未转化的“假转化体”，得到具有Kan抗性的转基因植株。身一‘》 4．转基因植株的鉴定 ／提取转基因植株的总DNA，对其进行PCR扩增，大部分转化植株呈阳性，而 非转化植株呈阴性：对PCR阳性植株进行PCR—Southern杂交和Southern杂交分 析，转化植株都有特异杂交带，而对照无特异杂交带，结果证明cpTI基因已被 整合到花椰菜的基因组中。同时对转化植株进行初步的离体叶片饲虫试验，结果 显示转化植株具有一定的抗虫性。A一 v。 关键词： 花椰菜 农杆菌介导 遗传转化 CpTI基因 转基因植株 一丝一型堕 Study Study Transformation of Cowpea Trypsin Inhibitor into Caul iflower(Brassica oleracea VHF．botrytis) Abstract There researches about transferring B．t gene into cau]i— flower，bu few reported about transferring CpTI gene into cauli— flower．In this paper，cotyledons and hypocotyls used explants， by of plant genetic engineering，foreign insect—resistance gene be transferred into plant cell．Co-pea trypsin inhibitor(CpTI)gene transferred into cauliflower by agrobacterium—mediated transformation method．and the transgenic cauliflower plants obtained．The main results below： 1．High efficiency regeneration system of cauliflower The high efficiency regeneration system is the base of plant genetic transformation．The explants cotyledons and hypocotyls and MS used basic midium．By supplying different concentration of 6一BA，NAA， got the optimum media which induced the adventitious bud differentiation of cauliflower explants types．The optimum m