节节麦高分子谷蛋白亚基序列研究及体外突变-植物学专业论文.docx

指导小组成员名单导 指导小组成员名单 导 师：庄塞苤熬援 指导教师：蓝塞麴副麴援 睦塞宽整援 鲑扬熬攫 英语缩写表英语缩写 英语缩写表 英语缩写 英语全称 中文名称 AS—PCR allelic specific—p]oymerase chain 亚基特异性扩增 reaction CE capillary electrophoresiS， 毛细管电泳 FZCE free zone capillary electrophoresis 自由区域毛细管电泳 HMW high molecular weight 高分子 LMW low molecular weight 低分子 MAS marker assisted selection 标记辅助选择 NDM nested del etion method 巢式缺失法 RDM restricted deletion method 限制性缺失法 RP—HPLC reversed phase high performance 反相高效液相色谱 1 iquid chr。matography SDS sodJu玎)dodecyl sulfate一 聚丙稀酰胺凝胶电泳 polyaerylamide gel electrophoresis SNP single nucleotide polymorphism 单核苷酸多态性 一羔!! !!翌!!!!型!!!!!!!!!! 笪望重星壁型 摘 摘 要 普通小麦(Triticum aestfvum)是世界上最重要的农作物之一。节节麦 (Aegilops tauschii)是普通小麦D基因组的供体，并且含有比普通小麦D基 因组更为丰富的遗传变异，从而成为小麦育种中重要的遗传资源。高分子谷蛋白 亚基是小麦籽粒中一类重要的贮藏蛋白，其组成和含量与小麦的加工品质密切相 关。目前已在节节麦中发现了许多普通小麦中不存在的特有高分子谷蛋白亚基类 型，例如Dtxl．5+D‘ylO。品质分析推测DIxI．5+D‘ylO亚基可能与小麦优质烘烤品 质有关，因此对节节麦高分子谷蛋白亚基的研究将有助于进一步改良小麦品质。 利用～种新的基于限制性内切酶的方法——限制性缺失法，本研究测定了 D1x1．5+D‘Y10亚基编码基因全长开放阅读框的DNA序列并进行原核表达，为研究 D‘x1．5+D‘y10亚基的结构与功能奠定了基础。序列比较显示D’X1．5和D‘y10亚基 都具有与已知亚基相同的基本结构。值得注意的是，节节麦的D’y10亚基和普通 小麦的DylO亚基的中间重复区氨基酸序列具有较大的差异，证实了这两个具有 相同SDS—PAGE迁移率的亚基是两类不同的亚基。根据不同来源的∥J／．5基因5’ 段和部分编码区的特征单核苷酸多态位点，本研究设计了一组能特异性扩增鉴定 ∥z，．5的AS--PCR引物。这组As—PcR引物能比传统SDS—PAGE方法更为快速和 精确的筛选Dx1．5+D‘ylO亚基，从而有助于利用这对亚基进行小麦育种。 根据高分子谷蛋白亚基编码基因5’端和部分编码区的DNA序列，不同来源 的D‘x2．1亚基可以分为两类：D‘x2．1a和D1x2．1b。利用SSR标记对这些材料D 基因组的亲缘关系分析进一步支持了这种分类。同时，序列比较也证实了D’ylO 亚基和DylO亚基是两类不同的亚基。因此基于SDS—PAGE的常规分类方法会对 某些高分子谷蛋白亚基进行错误分类，而利用DNA序列多态性对亚基进行分类将 是一种更为精确的高分子谷蛋白亚基的分类方法。 PCR介导重组是一种扩增过程中常见的重组现象。本研究比较了扩增高分子 谷蛋白亚基编码基因过程中不同PCR程序对PCR介导重组发生的影响，证实了较 短的延伸时间有利于重组的发生。对重组产物的序列分析显示PCR介导重组不仅 可以在同源基因间发生，也可以在含有重复片段的同一基因内发生。序列比较显 示本研究得到的PCR介导重组产物与天然高分子谷蛋白亚基具有相同的基本结 构，但它们中间重复区的差异相当大。利用高分子谷蛋白亚基的特异性多克隆抗 体，Western杂交实验证实高分子谷蛋白亚基编码基因的PCR介导重组产物可以 进行原核表达。因此PCR介导重组是一种产生新的高分子谷蛋白亚基重组类型的 有效方法，将为小麦品质改良育种提供丰富的遗传资源，同时也有助于深入研究 高分子谷蛋白亚基的结构与功能。 AbstractCommon Abstract Common wheat(Triticum aestivum)iS one of the most important crops in the world．Aegi!ops tauschii is commonly accepted as the D genome donor of com