降低细胞内GSH浓度对乳腺癌细胞阿霉素敏感性的影响-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

四川大学病理学与病理生理学硕士学位沦文中文摘要 四川大学病理学与病理生理学硕士学位沦文 中文摘要 降低细胞内GSH浓度对乳腺癌细胞阿霉素敏感性的影响 病理学与病理生理学专业 研究生：韩晓群 指导教师：王树人教授 摘要 抗肿瘤药物的毒副作用及肿瘤细胞耐药已成为当前制约肿瘤治疗的 重要因素。抗肿瘤药物通过抑制肿瘤细胞分裂增殖过程中的某些环节而 抑制或杀灭肿瘤细胞的同时，对机体中的一些正常组织和细胞也会产生 损害，从而引起许多毒副作用。抗肿瘤药物的剂量越大，毒副作用也越 强。此外，在长期应用抗肿瘤药物的过程中，肿瘤细胞会对抗肿瘤药物 产生耐药性，从而影响抗肿瘤治疗的效果。肿瘤细胞产生耐药性的机制 众多，其中最受关注的是肿瘤细胞的多药耐药性(multidrug resistance， MDR)。目前认为，MDR的主要机制与肿瘤细胞对抗癌药物的主动外排 有关，抗癌药物主动外排的主要结构包括细胞表面跨膜蛋白一P．糖蛋白 (P—glyceprotein，P-gp)和多药耐药性相关蛋白(multidrug resistance- associated protein，MRP)。此外药物作用靶标如受体、酶等的改变，细胞 防御系统的增强以及细胞DNA修复功能的增强等，与肿瘤细胞耐药性的 产生也有着密切的关系。大量临床研究试图采用MDR调节剂逆转肿瘤 细胞的耐药性，但效果并不理想。最新研究表明，细胞内还原型谷胱甘 肽(reduced glutathione，GSI-I)水平对于肿瘤的发生、发展及肿瘤细胞耐药 性的产生具有至关重要的作用。那么，改变细胞内GSH浓度是否可以改 变肿瘤细胞对抗肿瘤药物的敏感性?肿瘤细胞内的GSH浓度在肿瘤细 四川大学病理学与病理生理学硕士学付论文胞耐药机制中又发挥了何种作用?上述问题的阐明不仅具有明确的理论 四川大学病理学与病理生理学硕士学付论文 胞耐药机制中又发挥了何种作用?上述问题的阐明不仅具有明确的理论 价值，而且具有一定的临床应用前景。 我们首先应用不同浓度阿霉素(adriamyein，ADM)分别处理人乳腺 癌阿霉素耐药和敏感细胞株(MCF．7／ADM和MCF．7／S)，采用MTT法 检测两种细胞的生存率，并通过计算两种细胞的IC50(存活率为50％时 的药物剂量)的比值来计算耐药细胞株的耐药倍数；选用谷胱甘肽耗竭 剂马来酸--7,酯(diethylmaleate，DEM)预处理人乳腺癌阿霉素耐药细胞 株MCF．7／ADM 3小时，以耗竭细胞内还原型谷胱甘肽，MTT法检测DEM 处理前后，在ADM作用下，MCF．7／ADM细胞生存率的变化，即 MCF．7／ADM细胞对ADM耐药程度的变化，并计算DEM对耐药细胞的 逆转倍数；采用荧光分光光度法同步检测细胞内GSH的耗竭程度，分析 细胞内GSH浓度的变化与MCF．7／ADM细胞对ADM耐药程度变化之间 的相关关系；同样，应用DEM处理阿霉素敏感细胞株MCF．7／S，检测 DEM处理前后，在ADM作用下，MCF．7／S细胞生存率的变化，即其对 ADM敏感性的变化，以及细胞内GSH的变化，以期从耗竭细胞内GSH 的角度寻找一条增强肿瘤细胞的药物敏感性，逆转肿瘤细胞耐药性的新 策略。 结果表明，人乳腺癌MCF．7细胞未经GSH耗竭剂DEM处理时，在 各种浓度ADM处理后，耐药株MCF．7／ADM细胞的存活率几乎不受 ADM浓度升高的影响，而敏感株MCF．7／S细胞的存活率则明显下降， 且与ADM浓度呈一定的量．效关系。耐药细胞株相对于敏感株的耐药倍 数为38．3倍。单独应用0．1lamol／L DEM处理细胞3小时，细胞内GSH 浓度下降(Po．01)，但其对细胞生存率无明显影响；单独应用ADM也 可使细胞内GSH浓度呈ADM浓度依赖性下降，而MCF-7／ADM细胞生 存率与对照组相比亦无明显变化；DEM预处理细胞3小时后再给以不同 2 四川大学病理学与病理生理学硕十学位论文浓度ADM处理细胞，细胞内GSH浓度则大幅度下降，其下降程度大于 四川大学病理学与病理生理学硕十学位论文 浓度ADM处理细胞，细胞内GSH浓度则大幅度下降，其下降程度大于 DEM和ADM单独应用之和，且随着细胞内GSH浓度的减少， MCF．7／ADM细胞对阿霉素的敏感性增强，与单独应用ADM相比，IC卯 值由(1075．72+28．10)mg／L下降至(314．11+30．17)mg／L，ICso值下 降3．4倍，逆转倍数为3．4，但其细胞生存率仍高于敏感细胞抹。DEM预 处理MCF．7／S细胞后，再以不同浓度的ADM处理细胞，细胞生存率及 细胞内GSH亦均较单独应用ADM明显下降，提示降低敏感株细胞的 GSH浓度亦使其对ADM的敏感性升高。相关性分析显示，MCF．7／ADM 及MCF．7／S