拮抗番茄青枯病内生细菌的定殖与控病作用研究-植物病理学专业论文.docxVIP

拮抗番茄青枯病内生细菌的定埴与控病作用研究摘 拮抗番茄青枯病内生细菌的定埴与控病作用研究 摘 要 番茄青枯病(Ralstonia solanacearum(smith)Yabuuchi et a1)是一类危害严重 的世界性病害。由于其可经土壤传播并在维管束中危害寄主，防治起来十分困 难。植物内生细菌作为病害的生防菌具有一定的优势。才卿究从番茄内生细菌中 寻找青枯菌的生防菌，并进一步明确了其定殖情况及控病作用。 1．采用表面消毒研磨分离的方法，从健康番茄“合作903”品种根系内获得细 ／ 菌分离物239个。l室内平板喷雾法拮抗试验表明，18个菌株在PSA平板上可明 ＼ 显抑制膏枯菌Bs01-05的生长，这18个菌株中仅7株可在NA平板上表现对 Bs01．05的拮抗。各菌株在平板上形成的抑菌带宽和透明度存在差异。01—144、 、 一、 。 01一182、01．188、01．19l-1、01—191．2在两种平板上均能形成宽而透明的抑菌带。一 2．采用番茄“合作903”品种对这18株平板拮抗菌进行温室盆栽控病试 验。／最终有2株(01．144、01．182)能够表现较好的控病效果，两次重复试验二 ( 者防效(25 d)均在40*／一50％。，y—丫7 ’t 3．对01．144菌株成功进行了抗药性标记。f通过逐步提高药物浓度的方法，获 { 得其抗链霉素200 u g·mLl和利福平100 p g·mL。1的自发突变株，记为01．144 K。 01．144。在NA及PSA上连续转代20次，仍具稳定的抗药性状，且其在平板及盆 栽条件下仍具对Bs01．05的拮抗性状，可以作为01．144的标记菌株进行定殖研 究。k～ 4．在01．144‘的定殖试验中，所用番茄品种、土壤和番茄育苗管理方式均与 盆栽控病测试中保持一致。f 01．144‘的浸种浓度约为2×109 cfu．mL一，灌根浓度 ～ 约为6×108cfu·mL～。结果表明： ①01．144‘菌液浸种或灌根处理番茄，均可使其定殖于根表、根内、茎内、 子叶及真叶组织内，并在一定时间内其可维持相当数量。因此，01．144具有良好 的宿主体内定殖与转导能力。验证了其内生性。 ②菌液浸种、直接灌菌或伤根灌菌三种方式处理番茄后，01．144‘在根、茎 内均有一个“由升到降”的数量变动趋势。从数量上看，根内茎内，而茎下部 茎上部；从数量变动幅度上看，根内茎内，茎下部茎上部。因而，01—144“ 在番茄根内具较强而稳定的定殖能力，茎下部次之，茎上部最差。伤根灌菌与直 拮执|茹青枯病内生细菌的定疰与控病作甬研究接灌菌处理的试验结果显示，伤根仅能在灌菌后初期使01．144‘在各组织中的数 拮执|茹青枯病内生细菌的定疰与控病作甬研究 接灌菌处理的试验结果显示，伤根仅能在灌菌后初期使01．144‘在各组织中的数 量高于未伤根处理。因而，伤根灌菌不能作为增加植株体内拮抗菌数量的有效途 径。 ③菌液浸种及后期(20d、30d)2次直接灌菌处理表明，每次灌菌后均可明 显增加01—144。在根、茎下部及茎上部组织内的定殖数量。适时灌菌可作为补充 植株体内拮抗菌数量的途径。 5．01—144菌株不同施用方式盆栽控病比较试验表明，仅菌液(约2x109 efu ·mL。)浸种处理不能表现控病效果：接病原前(2 d)菌液(约6X108cfu．mL’1) 灌根处理可起到明显的控病效果，防效可达40％左右；首次灌菌及lOd后再次灌 菌可明显提高控病效果，防效在60％左右。 6．按照细菌的传统鉴定方法，确定Ol一144、01-182、01．188均为枯草芽孢杆 菌(Bacillus subtilis)。＼ 一．． 一一十一+’、 V 关键词：番茄 青枯菌内生细菌定殖控病 拮抗番茄青枯病内生细藿的宽疽与控病作用研究Colonization 拮抗番茄青枯病内生细藿的宽疽与控病作用研究 Colonization and Disease—Control of Endophytic Bacterium Against Bacterial Wilt of Tomato Discipline：Plant Pathology；Direction：Plant Disease and Plant Beneficial Microorganism Supervisor：Assoc．Prof．Xiao Chonggang；Candidate：Long Liangkun Abstract The bacterial wilt of tomato caused by Ralstonia solanacearum is a serious disease which distributes widely in the world．It is ver