姜黄素通过DNA甲基化调控NEP表达减轻阿尔兹海默病细胞模型中炎症反应的机制研究-神经病学专业论文.docxVIP

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 AD Alzheimer’s disease 阿尔兹海默病 Aβ Beta- amyloid β-淀粉样蛋白 APP Amyloid precursor protein 淀粉样前体蛋白 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 bp base pair 碱基对 BSP bisulfite-sequencing PCR 亚硫酸氢盐测序聚合酶链 反应法 cDNA Complementary deoxynucleic acid 互补脱氧核糖核酸 CUR Curcumin 姜黄素 COX-2 Cyclooxygenase-2 环氧合酶-2 DMEM Dulbeccos modified Eagles medium Dulbecco 改良 Eagle 培养 基 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 DNA Deoxynucleic acid 脱氧核糖核酸 DNMTs DNA methyltransferase DNA 甲基转移酶抑制剂 ELISA Enzyme-linked immunoabsorbent Assay 酶联免疫吸附试验 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 HAT Histone acetylase 组蛋白乙酰化酶 HDAC Histone deacetylase 组蛋白去乙酰化酶 iNOS inducible nitric oxide synthase 诱导型一氧化氮合酶 IF Immunofluorescence 免疫荧光染色 NEP Neprilysin 脑啡肽酶 OPTI-MEM OPTI- modified Eagles edium OPTI 改良的 Eagle 培养基 PBS Phosphate Buffered Saline 磷酸盐缓冲液 RT-PCR Real-time Quantitative-PCR 荧光实时定量 PCR 1 姜黄素通过 DNA 甲基化调控 NEP 表达减轻阿尔兹海 默病细胞模型中炎症反应的机制研究 摘 要 阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease，AD) 是老年痴呆最常见的一种 类型。大脑内过度聚集的 β-淀粉样蛋白(Beta-amyloid，Aβ)所诱导的慢 性炎症反应在 AD 的发生及发展中发挥着关键的作用。脑啡肽酶(EC 1，Neprilysin，NEP)是一种锌依赖的金属肽酶，它是降解 Aβ 最主要的酶，它还能抑制 AKT 及其下游信号通路的活性，但在 AD 患 者脑内 NEP 基因的表达较正常人群明显下降。最近的研究表明，NEP 启动子区 DNA 的超甲基化水平与其表达抑制密切相关。 姜黄素 (Curcumin, CUR)是植物姜黄中萃取的一类化合物，它具有强大的抗炎 及抗氧化作用。越来越多的研究表明，CUR 还是一种潜在的 DNA 甲 基转移酶(DNA methyltransferase，DNMTs)抑制剂，仅在纳摩尔水平， 就能抑制基因 DNA 的甲基化水平。但目前尚无研究报道 CUR 对 AD 相关基因 DNA 甲基化水平的影响以及 CUR 去甲基化的作用是否与其 抗炎的作用相关。本文以野生型小鼠神经母细胞瘤 N2a/wt 细胞及稳定 转染 Swedish 家族突变的人 APP695 的小鼠神经母细胞瘤 N2a/APPswe 细 胞 为 AD 的 细 胞 模 型 ， 采 用 亚 硫 酸 氢 盐 测 序 聚 合 酶 链 反 应 法 （bisulfite-sequencing PCR，BSP）检测 CUR 处理前后两种细胞中 NEP 2 基因启动子区 DNA 的甲基化水平；Q-PCR、Western blot 及免疫荧光 法分别检测细胞中 NEP 的 mRNA、蛋白质表达水平；抑制剂阻断 NEP 后，Western blot 及免疫荧光法检测 AKT/NF-κB 信号通路活性及其下 游靶蛋白的表达。结果显示：①5μM 的 CUR 能够有效上调 N2a/wt 细 胞及 N2a/APPswe 细胞中 NEP 的 mRNA 和蛋白水平；②5μM 的 CUR 能够诱导 N2a/wt 细胞及 N2a/APPswe 细胞中 NEP 启动子区 DNA 发生 去甲基化；③NEP 抑制剂 Thiorphan 逆转了 CUR 对 N2a/APPswe 细胞 中 AKT/NF-κB 信号通路活性的抑制作用；④5μM 的 CUR 时间依赖地 下调了 N2a/APPswe 细胞中 AKT/NF-κB 信号通路下游炎症相关蛋白 COX-2 和 iNOS 的水平。上述结果表明，在 AD 细胞模型中，CUR 通 过