结直肠癌患者血浆K-ras基因突变检测的研究-普外科专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立遂行磺究所取褥的残采。除文中毫经注羁鞭矮豹肉容井，本论 文不包含任何其他个人或集体已经发表线撰写过的科研成果。对本 文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名： 至些日期_丝墨丛幺 关于学佼论文使震授权鑫奄声明 本人完全了解由东大学有关傈螯、馊用学链论文赡巍定，交意 学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件翻电子版，允 许论文被查阅和借阅：本人授权山东大学可以将本学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他 复剃手段僳存论文翻汇编本学蕴论文。 (髹密论文在孵密基应遵守越援定) 论文作者签褒：薹量幺导师签名：!麴圣．日期：丝兰竺乡 山东大学硕士学位论文结直肠癌患者血浆K-ras基因突变检测的研究 山东大学硕士学位论文 结直肠癌患者血浆K-ras基因突变检测的研究 硕士研究生： 王建新 硕士生导师： 何庆泗副教授 中文摘要 目的：检测结直肠癌患者血浆、肿瘤组织及正常人血浆中的K．ras基 因突变，分析血浆K．ras基因突变与结直肠癌生物学特征之间的关系，初 步判断检测结直肠癌血浆K．ras基因突变在结直肠癌诊断中的应用价值。 方法： 1．选择42例结直肠癌患者及20例正常人作为研究对象。结直肠癌 患者均经手术及病理证实，20例正常人为住院检查除外恶性肿瘤者及门 诊部分健康志愿者。 2．结直肠癌患者(均于术前)及正常人抽取外周血3ml，放入试管 中抗凝，离心，提取血浆1．5ml，立即放入一80C冰箱保存，结直肠癌患者 术后留取新鲜肿瘤组织标本l×1×lcm3，亦放入．80C冰箱保存备用。 3．提取血浆及肿瘤组织DNA，选择K。ras基因第12位密码子位点 进行PCR扩增，扩增产物变性，然后行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，最后 银染显色。 4．观察记录实验结果。结果判断：凡肿瘤组织出现与markerDNA 149bp平行的条带，即认为无K-ras基因12密码子突变；出现与markcrDNA 149bp不平行的条带，即认为有K．ras基因12密码子突变。凡赢浆出现 与markerDNA 143bp平行的条带，即认为无K．rss基因12密码子突变： 出现与markerDNA 143bp不平行的条带，即认为有K．ra$基因12密码子 突变。 5．进行统计学处理(卡方检验及列联表卡方检验)，分析血浆K．ras 基因突变与结直肠癌的肿瘤部位、不同分化程度、不同临床分期，有无 山东大学硕士学位论文淋巴结转移之间的关系，并与肿瘤组织、正常人血浆K—ras基因突变相比 山东大学硕士学位论文 淋巴结转移之间的关系，并与肿瘤组织、正常人血浆K—ras基因突变相比 较，判断检测血浆K—ras基因突变在结直肠癌诊断中的应用价值。 结果： 1．42例结直肠癌患者血浆K．ias基因突变17例，突变率为40．48％， 肿瘤组织K—ras基因突变19例，突变率为45．24％。 2．对照组20例血浆K．ras基因突变0例，突变率为0％。 3．血浆K．ras基因突变率与肿瘤组织K．ras基因突变率有较高的一 致性，一致率为95_2％。 4．结直肠癌患者与对照组血浆K．ra$基因突变率有极显著差异。 5．结直肠癌血浆K一185基因突变在结直肠癌患者的不同年龄、不同 性别、不同肿瘤大小、不同分化程度、不同临床分期、有无淋巴结转移 之间的突变率差异均无显著性。 结论及意义： 1．K—ras基因突变在结直肠癌的不同分化程度、不同发展阶段均有 发现，提示K．ras基因突变是结直肠癌发病机理中普遍、共有的机制，属 于结直肠癌发生的早期基因改变，并在结直肠癌的发生发展中发挥一定 的作用。这为应用检测K．rfls基因突变对结直肠癌进行早期基因诊断，提 供了一定的理论依据。 2．血浆K．ras基因突变率较高，并与肿瘤组织K．rfls基因突变率有 较高的一致性，因此，检测血浆K．ras基因突变可作为结直肠癌的辅助珍 断方法，具有一定的临床应用价值。 关键词：血浆 结直肠癌 K—ras基因 突变 聚合酶链反应 山东大学硕士学位论文DETECTION 山东大学硕士学位论文 DETECTION OF MUTANT K-RAS GENE IN PLASMA OF PATIENTS WITH CoLoRECTAL CANCER Postgraduate Wang jianxin Tutor He qingsi Abstract Objective： To detect the mutation of K—ras gene in plasma and tumor