结核分枝杆菌抗原的制备及其在诊断中的应用-病原生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 创 性 说 明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含 为获得河北联合大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材 料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了 明确的说明并表示了谢意。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解河北联合大学有关保留 、使用学位论文的规定， 即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文 ，学校有权保 留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论 文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检 索和交流。 作者及导师同意论文公开及网上交流的时间： □ 自授予学位之日起； □ 自 年 月 日起。 作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 摘 要 摘 要 目的 目前结核病的检测方法多种多样，免疫学检测方面主要包括基于细胞免疫 的检测方法和基于体液免疫的检测方法。基于细胞免疫的检测包括皮肤试验和细胞 因子的检测。基于体液免疫的检测包括抗原检测和抗体检测。免疫学检测获得较高 敏感性和特异性的关键在于抗原的选择，选择出特异性好，敏感性高的结核分枝杆 菌抗原在结核病检测方面具有重要意义。本课题主要是对结核分枝杆菌 RD1 区多 种和 Rv3452 抗原进行制备，并研究制备出的结核分枝杆菌抗原在结核病诊断中的 应用价值。 方法 根据文献报道，从 TB databases 数据库（ HYPERLINK / /content/ index）下 载结核分枝杆菌 H37Rv 菌株 RD1 区及 Rv3452 抗原的核苷酸序列和氨基酸序列。 运用 Biosun 生物软件分析 RD1 区及 Rv3452 抗原表位分布情况，筛选峰值较高表 位区段，而后截取其相应氨基酸序列和基因序列设计引物，采用分子克隆技术克隆 相应基因，分别构建原核表达载体，诱导表达并纯化抗原，建立间接 ELISA 方 法，检测患者血清中相应 IgG 抗体的水平。 结果 通过原核表达载体，共成功获得了 5 种 RD1 去抗原、全长 Rv3452 抗原和 Rv3452-2 区段抗原。在初步筛选出特异性和敏感性比较好的抗原的基础上扩大检 测样本，并把样本进行分组。本实验所用样本分为三组，第一组为涂片和培养共同 阳性组（83 例），第二组为涂片阴性且培养阳性组（48 例），第三组为涂片和培 养共同阴性组（79 例）。通过间接 ELISA 法进行检测，结果显示 7 个抗原敏感性 分别为 56.19%、26.67%、65.7%、58.57%、60.48%、70.85%和 65.24%。Rv3871、 Rv3874、Rv3875、Rv3876、Rv3879、Rv3452 和 Rv3452-2 抗原痰培养阳性组的检 出 率 分 别 为 54.19% 、 59.54% 、 27.48% 、 54.96% 、 55.73% 、 70.8% 和 58.7% 。 Rv3871、Rv3874、Rv3875、Rv3876、Rv3879、Rv3452 和 Rv3452-2 抗原对痰涂片 检测为阴性组的检出率分别为 62.21%、73.22%、25.98%、 58.26%、66.92%、 69.29% 和 69.29% 。 Rv3871 、 Rv3874 、 Rv3875 、 Rv3876 、 Rv3879 、 Rv3452 和 Rv3452-2 抗原对痰培养阴性组的检出率为 59.49%、78.48%、25.31%、65.82%、 68.35% 、 70.88% 和 75.94% 。 Rv3871 、 Rv3874 、 Rv3875 、 Rv3876 、 Rv3879 、 Rv3452 和 Rv3452-2 抗原血清学法检测检出率分别为 56.19%、65.7%、26.67%、 58.57%、60.48%、70.85%和 65.24%。而对相同的样本涂片法的检出率为 39.52%， 培 养 法 的 检 出 率 为 62.38% 。 结 果 比 较 可 得 CFP-10 （ Rv3874 ） 、 Rv3452 和 - I - 河北联合大学硕士学位论文 Rv3452-2 三个抗原的检出率高于培养法的检出率，同时这七个抗原除 ESAT-6 （Rv3875）抗原外其它抗原的检出率均高于涂片法的检出率。为了了解临床治疗 过程中患者的 IgG 抗体变化水平并评价这些抗原在抗结核治疗效果评价中的应用 价值，我们选取了 88 例治疗过程中的活动性肺结核患者的系列血清，分别为治疗 0 个月、2 个月、4 个月和 6 个月