金莲花中荭草苷牡荆苷的提取纯化及其抗肿瘤作用的初步研究-药理学专业论文.docxVIP

] ] l[1ll l[1ll lrFz illl Ill IIlIl l Il lll{ ＼1 90 1 697 目 录 中文摘要 l 英文摘要 3 英文缩写 6 研究论文金莲花中荭草苷牡荆苷的提取纯化及其抗肿瘤作用的初步研究 前言月U舌．． ．． ．．’77 第一部分制备色谱法分离纯化金莲花黄酮中荭草苷和牡荆苷 材料与方法 9 结果 l 2 讨论 ． ．． 1 3 结{仑 1 6 第二部分金莲花中荭草苷和牡荆苷的抗肿瘤作用 材料与方法 l 7 结果 1 9 讨论 2 l 结论 24 附图 25 附表 37 参考文献 40 综述金莲花研究进展 42 致谢 55 个人简历 56 中文摘要金莲花中荭草苷牡荆苷提取纯化及其抗肿瘤作用的初步研究 中文摘要 金莲花中荭草苷牡荆苷提取纯化及其抗肿瘤作用的初步研究 摘 要 目的：肿瘤已成为当今世界危及人类生命的一种最常见，最严重的疾 病。化疗是临床治疗癌症的主要方法，然而大多数抗肿瘤西药对癌细胞和 人体正常细胞的选择性差别不大，导致在治疗过程中人体不良反应严重且 广泛存在，使得众多患者不能耐受化疗。不同肿瘤对药物的敏感性不同和 易产生耐药性，也使肿瘤化疗的疗效受到一定的限制。 近年来，植物来源的抗肿瘤药物重新获得重视，不仅为发现新的抗肿 瘤药物提供广阔领域，也可为设计制备更理想的新药提供独特的化学结 构，并促进肿瘤治疗理论创新和发展。本课题旨在建立PHPLC法大规模 制备荭草苷、牡荆苷纯品，探讨黄酮碳苷单体荭草苷、牡荆苷抗肿瘤作用， 为抗肿瘤药物筛选及抗肿瘤药物构效关系的研究提供实验依据。 第一部分金莲花中荭草苷、牡荆苷的提取分离 方法：1建立HPLC、PHPLC测定荭草苷、牡荆苷的分析分离方法。 HPLC：采用Hypersil BDS C18(4．6x150 mm，5 lxm)，流动相为乙腈．1％ 乙酸(15：85)，流速为1．0 ml·min．1，柱温30℃，检测波长340 nnl；PHPLC： 采用ZORBAX SB．C18：(21．2 mmx250 mm，7¨m)，流动相为乙腈．1％ 乙酸(15：85)，柱温：25℃，流速：20 ml·min．1，检测波长：340 nm，进 样量：6 ml，馏分收集：基于峰，阈值Min：2．2。 2金莲花总黄酮的提取纯化：(1)金莲花用丙酮回流提取除去色素，将 干燥后的滤渣用70％乙醇于80℃水浴回流提取1．5h，提取两次，合并滤 液并回收乙醇至无醇味，离心浓缩液，收集上清液，即得总黄酮提取液。 (2)黄酮浓缩液300ml加到大孔树脂柱上，静止吸附约20min。用4倍柱体 积蒸馏水和70％乙醇洗脱。HPLC随时检测洗脱液中荭草苷、牡荆苷，收 集70％乙醇洗脱液。洗脱液经乙酸乙酯萃取，浓缩蒸干成固体。 3金莲花荭草苷牡荆苷分离纯化及鉴定：(1)将上述蒸干的总黄酮固体 用流动相超声溶解，过0．45I．tm有机微孔滤膜，制备型高效液相色谱进样， 分别收集荭草苷、牡荆苷馏分，低温冷冻干燥即得荭草苷、牡荆苷单体。 中文摘要(2)采用高效液相色谱法(HPLC)测定样品中荭草苷、牡荆苷含量，用荭 中文摘要 (2)采用高效液相色谱法(HPLC)测定样品中荭草苷、牡荆苷含量，用荭 草苷、牡荆苷标准品作对比，1H-NMR鉴定制备的荭草苷、牡荆苷样品结 构。 结果：在所建立的HPLC条件下，测定分离得到的荭草苷、牡荆苷单 体纯度为98％以上，1H-NMR鉴定制备所得荭草苷、牡荆苷单体与标准品 图谱一致。 结论：本实验所建立的制备型色谱分离荭草苷、牡荆苷单体的方法， 操作简便，重复性好，分离得到的荭草苷、牡荆苷单体可作为定性、定量 分析使用的对照品，同时可用于抗肿瘤作用的研究。 第二部分金莲花中荭草苷、牡荆苷的抗肿瘤作用 方法：1以人食管癌EC．109细胞为研究对象，研究金莲花荭草苷、 牡荆苷体外抗肿瘤作用及其效果。用不同浓度荭草苷、牡荆苷作用于对数 生长期的EC．109细胞，通过CCK-8法检验其对EC．109细胞体外生长、增 殖的抑制作用。 2通过凋亡试剂盒Hoechest33258荧光染色形态观察、琼脂糖凝胶电 泳检测DNA Ladder、AnnexinV．FITC／PI．FCM，检验荭草苷牡荆苷诱导 EC．109细胞凋亡情况。 结果：荭草苷、牡荆苷对EC．109细胞体外生长、增殖具有明显的抑 制作用，均能够诱导EC．109细胞凋亡。作用随着药物浓度的增高而增加、 随着作用时间的延长而显著增高。相同的物质量摩尔浓度进行比较，抑制 EC．109细胞增殖及诱导凋亡的效果，荭草苷的作用强于牡荆苷。 结论：荭草苷和牡荆苷均具有较好的抗EC．109食管癌细胞作用，这 为黄酮碳苷类化合物抗肿瘤研究提供了实验依据，为开发新的抗肿瘤药 物、探讨其在食管癌治疗中的可能