不同龋敏感儿童菌斑中变异链球菌数量和菌群比例定量研究.docxVIP

不同嶠敏感儿童菌斑中变异链球菌数量和菌群比例定量研究 ［摘要］目的比较不同齬敏感儿童口腔菌斑中变 异链球菌数量及其在菌群中比例的差异。方法采集26名3? 4岁不同齬敏感的儿童牙面菌斑，运用TaqMan探针实时荧光 定量聚合酶链反应（PCR）检测有頻组和无嶠组儿童菌斑中 变异链球菌和总菌数量，以及变异链球菌在总菌群中所占的 比例，并对结果进行分析比较。结果有齬组和无舗组儿童 每毫克菌斑中变异链球菌菌落数分别为1. 33X105 每毫克菌斑中变异链球菌菌落数分别为 1. 33X105、 1. 16X103 CFU ? mg-1,二者间差异有统计学意义（P=0. 033）； 每毫克干重菌斑中总菌落数分别为7. 17X107. 1.01X108 CFU ? mg-1,二者间差异无统计学意义（P=0.418）；有齬组 和无齬组变异链球菌在总菌中所占比例分别为0. 058 6和 0.018 6,二者间差异有统计学意义（P=0. 008）。结论 无嶠 与患嶠儿童牙面总菌群数量差异无显著性，但患嶠儿童牙面 菌斑中变异链球菌数量更多，在总菌群中所占比例更大。提 示菌斑中变异链球菌与总菌的比例与儿童患嶠风险密切相 关，可以作为评估齬易感性和预测鵠病发展趋势的新指标。 ［关键词］嶠齿；乳牙；牙菌斑；变异链球菌；实 时荧光定量聚合酶链反应 ［中图分类号］R 781. 1 ［文献标志码］A ［doi］ 10. 7518/hxkq. 2013.06.018 乳牙頻是影响儿童口腔健康的主要疾病之一，变异链球 菌(Streptococcus mutans, S. mutans)是与乳牙齬关系 最密切的致犒菌之一。林焕彩等［1］研究发现高犒儿童变异 链球菌检出率高于无頻儿童，菌斑致頻菌的种类越多，犒活 跃性也就越高。支清蕙等［2］通过任意引物聚合酶链反应 (arbitrarily primed-polymerase chain reaction , AP-PCR)法验证了上述结果，推断口腔中定植的变异链球菌 是乳牙嶠高发的危险因素。流行病学调查表明：驕活跃性分 布不均，在发达国家学龄儿童中60%?70%齬发生在20%人群 ［3］。另外美国公共卫生调查也显示：1/4的学龄儿童拥有 3/4的頻齿［4］。以往文献［5-6］显示儿童頻病不均衡性与变 异链球菌数量密切相关。近期研究［7］表明口腔菌群是个复 杂的微生物群落，菌种的多样性和复杂性对鵠齿的发生起着 更重要的作用，提示变异链球菌在总菌群中的比例能更好地 反映驕齿发生是多因素综合作用的结果［8-10］ o由此可见， 儿童口腔中变异链球菌数量及与菌群比例的定量研究是了 解頻齿高危人群和儿童頻病不均衡性的重要途径。 本研究应用TaqMan探针实时荧光定量聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR)法对不同嶠敏感儿童 菌斑样本进行检测，比较有轄和无嶠儿童牙菌斑中变异链球 菌数量、总菌量以及变异链球菌在总菌群中所占比例的差 异，为从细菌水平上对乳牙頻齿的发生进行预测和预防提供 相关依据。 1材料和方法 1.1主要材料、试剂和仪器 变异链球菌标准菌株Ingbritt （c）（首都医科大学微生 物教研室提供），TaqMan Universal PCR Master Mix.ABI 7500 型定量PCR仪（Applied Biosy-stems公司，美国），溶菌酶、 核糖核酸酶A （Merck公司，德国），杆菌肽（Amresco公司， 美国），TYC Medium 培养基（Idgplc 公司，英国），QIAamp DNA Mini Kit 试剂盒（Qiagen 公司，德国），Micro-Modulyo 冷 冻干燥机（Thermo Electron公司，美国），BioNano超微量 紫外可见分光光度计（Thermo Scien-tific公司，德国）。 2方法 1.2. 1研究对象随机抽取北京市海淀区某幼儿园小班 学生26名，其中男14名，女12名。年龄3?4岁，平均年 龄（3.7±0.3）岁。抽样人群符合以下要求：采样前2周内 未服用过抗生素类药物，除頻齿外无其他口腔疾病及系统性 疾病病史，采样前2 h禁食，采样期间除儿童日常刷牙外无 其他特殊口腔健康措施实施。本研究经北京大学生物医学伦 理委员会批准，所有研究对象家长均知情同意。 1.2.2 口腔检查由1名口腔专业医师担任检查者，在 幼儿园现场采集頻病临床数据。鵠病检查程序、器械和诊断 标准依据WHO 口腔健康调查基本方法(3版)。检查者经第三 次全国口腔健康流行病学调查技术指导组成员培训，统一齬 病检查方法和标准，标准一致性检验Kappa0. 8,项目检查 前后检查者自身标准一致性检验Kappa0. 9o 1名经培训的 护士负责记录数