T淋巴细胞表面CD4和CD45RA检测及其在慢性肾衰中的.doc

PAGE PAGE 1 T淋巴细胞表面CD4和CD45RA检测及其在慢性肾衰中的 席允平钱存荣刘和平孔宪涛张静路国强中华现代中西医杂志2004年10月第2卷第10期 　　【摘要】目的CD45RA是CD45分子5种异构体之一，选择性地表达在CD8+TC、NK细胞、B细胞以及肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）等表面，在细胞信号传导中具有重要调节作用，本文旨在探讨其在慢性肾衰时的表达情况。方法应用流式细胞仪（FCM）检测了慢性肾衰（CRF）患者和正常对照组CD3、CD4、CD8和CD45RA的表达。结果显示CRF患者CD4+细胞百分率显著降低（Plt;0.01），CD45RA+细胞百分率亦明显降低（Plt;0.05）。结论这可能与CRF患者免疫功能尤其是细胞免疫功能降低有重要关系。 　　关键词慢性肾衰CD4CD45RA表达 　　DetectionofCD4andCD45RAonTlymphocytesurfaceanditssignificaneinCRF 　　XiYunping，QianCunrong，LiuHeping，etal. 　　406thHospitalofPLA，Lshun116041. 　　【Abstract】ObjectiveCD45RAisoneofthefiveisoformsofCD45molecule.ItexpressesselectivlyonCD8+TC，NKcell，Bcellandtumorinfiltratinglymphocyte（TIL）.CD45RAhasanimportantregulatingfunctionincellularsignaltransduction.MethodsInordertoexploretherelationbetweenCD45RAandchronicrenalfailures（CRF），wehaveanalyzedtheexpressionofCD3，CD4，CD8andCD45RAinCRFpatientsandnormalpeoplebyusingFMC.ResultsTheresultsindicatethatC D4andCD45RAexpressionisdecreasedsignifcantlyinCRFpatients（Plt;0.01orPlt;0.05）.ConclusionTheresultssuggestedthattheimmunefunction（especiallycellularimmunefuncˉtion）isdecreased. 　　KeywordsdetectionCD4CD45RATlymphocytesignificanceCRF 　　慢性肾功能衰竭患者简称肾衰（ChronicRenalFailure，CRF），是一种常见的严重临床症候群，预后不良。CRF是在各种慢性肾脏疾病的基础上，由于肾单位严重受损，缓慢出现的肾功能减退而致不可逆转的肾衰，同时往往伴有免疫功能的全面减退。本文应用流式细胞仪（FCM）检测了CD3、CD4、CD8和CD45RA在慢性肾衰中的表达，现报道如下。 　　1材料和方法 1.1检测对象CRF35例，男29例，女6例，平均年龄45.70±13.33岁。其中27例继发于肾小球肾炎，8例继发于肾盂肾炎。正常对照30例，男19例，女11例，平均年龄35.86±7.48岁，为体检健康者。 　　1.2材料 1.2.1动物BALB/C小鼠，4～6周龄，雌雄不拘，由中国科学院上海动物中心提供。 1.2.2细胞2H4杂交瘤细胞（分泌CD45RA单抗），系从ATCC（美国模式菌种收集中心）购得。 1.2.3培养基RPMI-1640（GIBCO）完全培养液含2mmol/L谷氨酰胺，青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml，10%新生小牛血清。 1.2.4CD45RA单克隆抗体制备2H4细胞复苏后，将培养好的杂交瘤细胞（1～2）×106/ml注入预先用降植烷处理过的小鼠腹腔中（0.5ml）。2周左右采集腹水，3，000rpm离心15min，收集上清。先用饱和硫酸铵（ASA）盐析法进行粗提，然后将粗提后的单克隆抗体样品用20mmol/LNaCl、pH7.820mmol/L的Tris-HCl缓冲液透析，其间更换3次以上透析液，至钠氏试剂检测无黄色物形成为止［1］。 1.2.5CD3、CD4和CD8单克隆抗体系由华美生物工程公司提供。 1.3FCM测定CD3+、CD4+、CD8+和CD45RA+细胞取受检者肝素抗凝血100μl，抗CD3、CD4、CD8和CD45RA单抗各10μl。32℃孵箱孵育30min，经常摇动。每管加0.02mol/LpH7.4的PBS4ml，1，000rpm离心3min，洗涤2次。然后加