ABO血型全自动微板法检测技术应用及体会.doc

PAGE PAGE 1 ABO血型全自动微板法检测技术应用及体会 丁卫平李拴林柏亮中华医药杂志2004年9月第4卷第9期 　　　献血者ABO血型检测的手工操作工作量大，常因为过度频繁重复操作而产生血型误差。我站自2001年起用RSP全自动样本处理系统及SUNRISE恒温酶标仪判读微板法测血型后，降低了工作强度，避免了人为因素导致的错判。ABO血型检测的操作实现了自动化、标准化，并可将原始血型资料实现文件化管理，提高了临床输血的安全性。笔者将我站微板法ABO血型全自动技术在实际工作中的应用体会及注意事项在这里进行总结、探讨。 　　1材料和方法 　1.1仪器与试剂GENESIS-RSP-150全自动样品处理系统（瑞士，TECAN公司），SUNRISE恒温酶标仪（瑞士，TECAN公司），TL-5.0台式平板离心机（上海），MM-2微量振荡仪（江苏金坛），96孔平底板，96孔U型板，抗-A，抗-B单克隆抗血清（购自长春生物制品研究所），自制试剂RBC悬液（A型和B型RBC分别取自3份新鲜EDTA-Na2）抗凝血，经混合后盐水洗涤配制成5%的RBC悬液）。 　　1.2应用软件PlateMateforWindows微板之友v3.2。 　　1.3实验方法微孔板自动扫描。 　　2微板法实验操作程序 　2.1正定型RSP-150自动样品处理系统按设定程序吸取生理盐水、RBC在96孔平底预稀释板配制RBC悬液，分别加入96孔U型板双孔中，按顺序加入抗A，抗B标准血清，离心、振荡、静置。凝集孔细胞沉积在孔底，不凝集孔细胞呈悬浮状态，微板在SUNRISE恒温酶标仪使用PlateMateforWindows微板之友分析判读结果，测定波长492nm，扫描微孔底40个点的透光度值。 　2.2反定型RSP-150自动样品处理系统分别将每份待测血浆加入U型微板双孔中，按先后顺序加入新鲜配制的A型和B型RBC悬液，离心、振荡、静置。酶标仪判读，测定波长620nm，扫描微孔底40个点的透光度值。 　2.3微板法ABO血型自动检测原理在世纪协和软件的凝集单元，设定相应的ABO血型正反定型程序，选择“读数”后，待测微板进入自动扫描暗室中，扫描方式为96孔同时进行，扫描U型孔底中线上40个点的透光度。凝集孔的RBC凝块聚集于孔中央，透光度小，而外周游离的RBC很少甚至没有，透光度大，透光度曲线呈“U”型，设定此类曲线为阳性参考曲线。非凝集孔的RBC均匀分布，透光度曲线平缓呈“-”型，设定此类曲线为阴性参考曲线，微孔板在酶标仪上读数后每一孔的曲线与设定的参考曲线相比较，根据程序设定的ABO血型正反定型结果模式统计判定样本的血型。 　3结果 　　通过2035份献血者样本的正反定型。得出正反定型实验一次判读准确率为99.81%，证明该实验方法可靠，异常结果出现为正反定不符，主要表现在反定型中，其中2份样本严重脂血，1份严重溶血，2份样本为血型抗体极弱。发现弱抗体的标本仍需以经典的常规方法进行确认。 　4讨论 　　要使微板法有较高的准确率有几点注意事项:（1）样本要经过抗凝处理，否则将会引起加样针堵塞，加样量不准及造成污染;（2）反定型使用RBC，最好为新鲜配制的RBC悬液，浓度控制在5%～10%之间，否则容易给酶标仪判读造成困难;（3）U型板底有异物或划痕时，容易误判，最好一次性使用微板。 使用自动化微板法血型检测的技术的优点:（1）采用自动化加样，加样量精确、迅速，避免了手工加样的人为误差;（2）酶标仪判读，血型结果自动打印，克服了手工检验血型无原始记录的漏洞，对血站技术资料文件化管理意义重大。（3）由于离心、沉淀、振荡，提高了弱抗体的检出率;（4）试剂用量少，经济;（4）降低了实验者的工作强度，减轻精神压力。运用了RSP自动加样，SUNRISE酶标仪结果自动判读的自动微析法，大大避免了人为因素造成的血型错误，这种方法确保了临床用血的安全，也可满足血站建立成批量的血型原始记录的实验记录档案。 　　作者单位:721007陕西省宝鸡市中心血站