Roche诊断的非均相免疫测定标准、标准化和可行性.doc

PAGE PAGE 1 Roche诊断的非均相免疫测定标准、标准化和可行性 随着《医疗机构临床实验室管理办法》三级甲等医院考核检查表的出台以及越来越多的临床实验室申请《医学实验室质量和能力认可准则（ISO15189：2007）》认可，检验结果的溯源性也越来越被实验室重视。籍此机会，将Roche诊断非均相免疫测定溯源性的过程和大家分享。 作为医学诊断，很重要的是要知道患者样品中关键分析物的浓度。对某指定的样品，每个结果必须籍检测组分的特定组合才会产生。由厂商提供检测组分，依据国际上可接受的参考系统进行特定的组合，例如：分析仪的类型、校准品、和试剂批号等。在实践中，对客户系统的确定的各组分组合，建立真实的校准关系，实施这个标准化。这样确保了厂商检测系统可以得到和选定的参考系统相同结果。 1、标准化的类型 1.1参考标准化 参考标准化的目的是确保在新的免疫检测中，分析物浓度的回收和特定的参考系统相对应，以及在未来的各个试剂和校准品批号中也能保持这个回收水平去创建一个基础。通常，新的免疫检测系统的参考标准化有三个做法。 1.1.1相对于参考方法的标准化 参考方法通常是一个物理-化学方法，可以对分析物含量得到正确和可重现的测定结果。它和样品状态无关，如：同位素稀释气相层析/质谱（ID-GCMS）检测雌二醇、睾丸激素、和孕酮。在这个情况下，对一组人血清和一级校准品用选定的参考方法测定。在有资格的特定实验室进行参考方法值的测定，该实验室确定检测血清的定值。 1.1.2相对于确认的参考物质的标准化 将含有确定分析物浓度的参考物质溶于一定体积复溶无分析物的人血清中。这个储存溶液和无分析物的人血清形成系列参考标准。在参考系统上，用新的免疫检测系统的一级校准品进行所有检测。 这个类型参考标准化的结果受参考物质的质量和参考标准配制的严密性、无分析物人血清和一级校准品的质量以及一级分析仪性能等的影响。由此，可以理解，参考方法高于参考物质。 1.1.3使用确定的候选参考方法的标准化 在没有参考方法或参考物质的情况下，只能相对于另外的确定方法，即候选的参考方法标准化。在此情况下，一组人血清和一级校准品的分析物含量用候选的参考方法确定。 使用候选的参考方法参考标准化的结果，还要受到使用的批号质量、候选参考方法性能（精密度、检测范围等）的影响。 1.2试剂标准化 试剂标准化的目的是将参考系统的回收水平传递给相应分析物的客户系统（近期的试剂/校准品），确保在整个产品效期内保持这个水平。为此，必须进行两项任务：首先，对新产生的校准品的校准值定值，第二，为新产生的试剂标准化。 1.2.1校准品值的设定 新批号校准品产生，必须对所有分析仪系统上的所有出厂的试剂批号设定校准品值。在校准品值设定过程中，校准品浓度值来自一级校准品和相应试剂的读数。 1.2.2典型的曲线参数 新试剂形成后，它必须和市场上所有批号的校准品结合起来进行标准化。第一步使用一级校准品和近期试剂组合，和在参考标准化中确定的靶值去形成相应的一级校准品曲线。第二步，在每种相应类型的分析仪系统上，获得试剂一级校准品曲线的常规校准品值。 1.2.3质量控制 为了确认标准化的正确度，对一批人血清，用一级试剂/一级校准品和近期试剂/校准品组（CalSet），在统计设计下进行检测。对比较的结果进行Passing/Bablok方法比较的分析。 2、二点非线性校准 现代分析仪技术使得所有系统的校准只需要对厂商的原有校准进行重新校准就可以了。在2点校准中，校准设计也是一个重要的问题。罗氏诊断公司使用先进的模拟技术，对用于多点校准的原有系列校准品组进行各种可能的校准品配对试验评价，以寻找出最佳组合，形成最后的校准品组合。 3、溯源性和不确定度 标准化和值设定的方法完全遵守法规要求，特别是IVD导则“体外诊断医学产品-检测生物样品中的量值-对校准品和控制品值设定的计量溯源性”〔ISO17511〕。 我们依据检测不确定度的导则，计算校准品定值不确定度。这和客户在样品检测时的最终不确定度不矛盾。后者还要另外涉及校准品和样品检测的方差。但是，校准品不确定度在最后样品的不确定度中肯定是重要的组分。