柔嫩艾美耳球虫烯醇化酶基因的克隆表达和抗原性分析探究.pdfVIP

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2019-03-27 发布于广西
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柔嫩艾美耳球虫烯醇化酶基因的克隆表达和抗原性分析探究.pdf

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江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆＡｇｒ.Ｓｃｉ.),２０１７,３３(３):６４２~６４８６４２ｈｔｔｐ:/ / ｗｗｗ.ｊｓｎｙｘｂ.ｃｏｍ郭长明,袁橙,张步彩,等.柔嫩艾美耳球虫烯醇化酶基因的克隆表达和抗原性分析[Ｊ].江苏农业学报,２０１７,３３(３):６４２-６４８. ｄｏｉ:１０.３９６９/ ｊ.ｉｓｓｎ.１０００-４４４０.２０１７.０３.０２３柔嫩艾美耳球虫烯醇化酶基因的克隆表达和抗原性分析１,２１,２２２１１１１郭长明 , 袁橙 , 张步彩 , 朱善元 , 严若峰 , 徐立新 , 宋小凯 , 李祥瑞 (１.南京农业大学动物医学院,江苏南京２１００９５；２.江苏农牧科技职业学院/ 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室, 江苏泰州２２５３００) 摘要: 从纯化的柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中提取总ＲＮＡ,应用ＲＴ-ＰＣＲ技术克隆获得了烯醇化酶基因 (ＧｅｎＢａｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ. ＧＵ１６９３３３)。烯醇化酶基因开放阅读框长１３３８ｂｐ,编码４４５个氨基酸。应用ＤＮＡｓｔａｒ软件对氨基酸序列的亲水区域和疏水区域的分布、抗原指数及Ｔ细胞基序进行分析,结果显示该蛋白质亲水性较强, ＋抗原指数高,含较多Ｔ细胞表位。同时构建了烯醇化酶原核表达重组质粒ｐＥＴ-２８ａ( )-ＥＮＯ。用ＩＰＴＧ对重组质粒４＋ × ｐＥＴ-２８ａ( )-ＥＮＯ进行诱导表达,ＳＤＳ-ＰＡＧＥ结果显示表达的融合蛋白大小约为５.１７１０ ,主要存在于裂解上清中。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ结果显示该重组蛋白可被抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗体识别,表明该蛋白质具有较好的免疫原性。关键词: 柔嫩艾美耳球虫；烯醇化酶；克隆；表达；免疫原性＋中图分类号: Ｓ８５８.３１２.７２３文献标识码: Ａ文章编号: １０００-４４４０(２０１７)０３-０６４２-０７Ｃｌｏｎｉｎｇ, ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄａｎｔｉｇｅｎｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｅｎｏｌａｓｅｇｅｎｅｏｆＥｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ１,２１,２２２１ＧＵＯＣｈａｎｇ-ｍｉｎｇ , ＹＵＡＮＣｈｅｎｇ , ＺＨＡＮＧＢｕ-ｃａｉ , ＺＨＵＳｈａｎ-ｙｕａｎ , ＹＡＮＲｕｏ-ｆｅｎｇ , １１１ＸＵＬｉ-ｘｉｎ , ＳＯＮＧＸｉａｏ-ｋａｉ , ＬＩＸｉａｎｇ-ｒｕｉ (１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭ