适合库尔勒香梨SCoT分析用的DNA提取方法研究.pdfVIP

新疆农业科学2014，51(8)：1417—1423 Sciences XinjiangAgricuhural doi：10．6048／j．issn．1001—4330．2014．08．007 和世玉，牛建新 (石河子大学农学院／园艺作物栽培生理与种质资源利用重点实验室，新疆石河子832003) 摘要：【目的】有效利用SCoT分子标记法对库尔勒香梨优良营养系中相关基因，获得高质量基因组DNA，对 目前常用的3种提取植物基因组DNA的方法进行比较研究，研究最适合库尔勒香梨SCoT分析的DNA提取 方法。【方法】采用改良CTAB法，改良SDS法和试剂盒法从库尔勒香梨优良营养系的叶片中提取基因组 DNA。采用NANODROP2000核酸仪检测DNA浓度和纯度，并用1．2％琼脂糖凝胶电泳检测其完整性。以3 种方法提取的基因组DNA为模板分别进行SCoT—PCR。【结果】改良CTAB法提取的基因组DNA的浓度为 600～1600 孔发亮；改良SDS法提取的基因组DNA的浓度为600～900 ng／o,L，A：60／A：80为1．8～2．0，A：60／A：。o为1．9～ 2．2，电泳结果显示：一条清晰的带，无拖尾现象只有一个点样孔发亮；试剂盒法提取的基因组DNA的浓度为 100～200 孔发亮现象，蛋白、多糖、酚类物质、RNA等去除彻底；以3种方法提取的基因组DNA为模板进行SCoT— PCR，PCR产物电泳结果显示：试剂盒法提取的DNA可以扩增出7条清晰明亮的带，改良CTAB法提取的 DNA只能扩增出4条清晰的带，改良SDS法提取的DNA只能扩增出2条带。【结论】比较目前常用的3种提 取植物基因组DNA的方法，综合成本高低，毒性大小，步骤多少，时间长短，试剂盒法是最适合提取库尔勒香 梨优良营养系叶片基因组DNA的方法。 关键词：库尔勒香梨；DNA提取；SCoT分子标记 中图分类号：$661．2 文献标识码：A 文章编号：1001—4330(2014)08—1417—07 AGenomicDNAExtractionMethodofKorla Fragrant for PearSCoT Analysis HE Jian—xin Shi—yu，NIU (Departmentof Horticulture，College矿Agronomy，ShiheziUniversity／KeyLaboratoUo厂Horticultural Cultivation and Utilization Crops o厂GermplasmResources，Shihezi832003，China) Physiology Xinjiang ordertousemolecularmarkerto relatedofKorla Peargex— Abstract：【Objective】In study gene Fragrant eellentcloneto DNAisoneofthecommitted madea with gethighquality steps．Thispapermainly comparison eunent three DNAext