适于番茄叶片蛋白质组分析的双向电泳优化体系的建立.pdfVIP

新疆农业科学2016，53(4)：610—616 Sciences Agricultural Xinjiang ———————————————————————————————————————————————————————————————一 doi：10．6048／j．issn．1001-4330．2016．04．004 适于番茄叶片蛋白质组分析的双向电泳 优化体系的建立 王强1，王娟2，李宁1，唐亚萍1，杨涛1， 王柏柯1，杨生保1，帕提古丽1，余庆辉1 (1．新疆农业科学院园艺作物研究所／新疆园艺作物生物技术与分子育种重点实验室，鸟鲁木齐830091； 2．新疆农业科学院经济作物研究所，乌鲁木齐830091) 摘要：【目的】建立适于番茄叶片蛋白质组分析的双向电泳(2一DE)技术，为开展番茄蛋白质组学研究奠定 技术基础。【方法】对番茄叶片蛋白质提取方法、蛋白质裂解液、上样量、胶条PH范围等关键步骤进行优化。 mmol／ moL／L尿素，2mol／L硫脲，4％CHAPS，30 【结果】采用三氯乙酸／丙酮法提取番茄叶片总蛋白质，含有7 L 4—7、18cm的IPG胶条在12％SDS—PAGE凝胶浓 8．0)裂解缓冲液，上样量为100mg，以pH Tfis—HCI(pH 度下进行双向电泳，得到了蛋白点均匀分布、低峰度蛋白点较为清晰，蛋白点数目多且分辨率高的2一DE图 谱。【结论】建立了一套适于番茄叶片蛋白质分析的双向电泳技术体系，为下一步在蛋白组学水平上分析番 茄逆境胁迫等相关蛋白提供了技术支持。 关键词：番茄叶片；蛋白质组；双向电泳(2一DE) 中图分类号：S188；$641．2文献标识码：A 文章编号：1001—4330【2016)04—0610—07 组学分析的基础。【前人研究进展】近年来，双向 0 引言 电泳技术广泛应用于植物等方面的研究，由于不 【研究意义】蛋白质组学是后基因组时代研 同研究作物的蛋白质组成千差万别，套用常规试 究生物学功能的重要组学，双向电泳技术(2一 验程序有可能得不到满意结果【3】。番茄不同器 DE)已经成为了蛋白组学研究的核心技术之一， 官蛋白质组学方面的研究有一些报道，如叶 而双向电泳技术涉及的环节较多，样品制备中植 片H。J、根∞o和果实1等，由于双向电泳涉及的 物组织中存在影响双向电泳的物质(如核酸、多 环节较多，植物组织中代谢产物、材料的多样性及 糖和脂类等生物大分子以及盐类)会阻塞凝胶孔 不同器官所含蛋白种类及数量等也不相同，往往 径，盐浓度过高会使等电聚焦的电压降低，甚至损 对电泳结果影响较大。【本研究切人点】国内外 坏IPG胶条…。其次植物组织中含有的色素、 研究番茄蛋白质组学的研究报道还很有限。利用 酚、多糖等代谢产物也会对后续蛋白质的分离和 双向电泳技术，比较番茄叶片总蛋白质的提取方 鉴定造成影响口J。除了样品制备外，上样量的大 法、蛋白质裂解液、上样量、IPG胶条等进一步的 小、蛋白质裂解的配方、IPG胶条的选择等都会对 优化。【拟解决的关键问题】探索出一套适于番 双向电泳的产生影响。任何一个环节出现问题都 茄叶片的双向电泳技术，以期得到蛋白质点数目 无法得到分辨率高的凝胶图谱。因此，建立一套 多，背景清晰，条纹较少，拖尾现象不明显的电泳 分辨率高的双向电泳体系是成功开展番茄蛋白质 图谱，为开展番茄蛋白质组学研究提供技术支撑。