吉非替尼联合培美曲塞克服非小细胞肺癌EGFR-TKI获得性耐药的体外研究-老年医学专业论文.docxVIP

安徽 安徽医科大学硕士学位论文 英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全名 NSCLC non-small-cell lung cancer 非小细胞肺癌 EGFR epidermal growth factor receptor 皮生长因子受体 EGFR-TKIs epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors 皮生长因子受体酪氨 酸激酶抑制剂 DMSO dimethylsulfoxide 二甲基亚砜 OD optical density 吸光度值 DCR disease control rate 疾病控制率 FCM flow cytometry 流式细胞仪 IC50 median inhibitory concentration 半数抑制浓度 PBS Phosphate buffer saline 磷酸盐缓冲液 PI Propidium iodide 碘化丙啶 CI combination index 联合指数 MS median survival 中位生存期 MTT 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-dip henyltetra-zolium bromide 四甲基偶氮咗盐 PFS progression-free survival 无进展生存 RR response rates 反应率 OS overall survival 总生存 1 PAGE PAGE 2 吉非替尼联合培美曲塞克服非小细胞肺癌 EGFR-TKI 获 得性耐药的体外研究 中 文 摘 要 目的：当前化疗和靶向治疗都由于耐药问题的出现而阻碍了其临床疗效的延续。 然而，化疗联合表皮生长因子受体酪氨酸酶抑制剂（EGFR-TKI）被推荐作为一种 策略用于克服非小细胞肺癌（NSCLC）患者 EGFR-TKI 获得性耐药。本研究通过体 外实验探讨靶向药物吉非替尼联合化疗药物培美曲塞作用于 EGFR-TKIs 获得性耐 药的 NSCLC 细胞株 PC9/GR 的抗肿瘤效应，并探讨其可能机制。 方法：吉非替尼和培美曲塞单药以及联合给药作用于 NSCLC 吉非替尼获得性耐药 PC9/GR 细胞株。MTT 法检测不同浓度的吉非替尼和培美曲塞对 PC9/GR 细胞株的增 殖抑制作用，并分别计算出两单药对 PC9/GR 细胞株的半数抑制率（IC50）及两药 联合作用于 PC9/GR 细胞的联合指数（CI）。Annexin V-FITC 荧光染色法观察细胞 凋亡形态学变化；流式细胞仪分别检测不同药物处理组对 PC9/GR 细胞株细胞周期 及凋亡率的影响。蛋白质印迹法检测不同药物处理组对 PC9/GR 细胞中 p-AKT 及 Bcl-2 蛋白水平的影响。 结果：吉非替尼和培美曲塞作用于 PC9/GR 细胞 72 h 的 IC50 分别为（4.94±0.44） μmol/L 和（0.51±0.023）μmol/L，两药均呈剂量依赖性的增殖抑制作用，且两 药联合时表现出明显的协同效应(CI1)。细胞周期分析显示吉非替尼将 PC9/GR 细 胞阻滞于 G0／G1 期；而培美曲塞将细胞阻滞于 S 期；培美曲塞联合吉非替尼使得 G0/G1 期细胞比例降低，而使相应的 S 期细胞比例增多(P0.01)。经 Annexin V-FITC 染色的各组细胞在荧光显微镜下显示两药联合组的细胞形态不规则，处于凋亡晚 期的细胞较其他处理组明显增多，可见细胞核固缩、碎裂。流式细胞仪检测各组 细胞凋亡率结果显示，联合用药组的细胞凋亡率高于阴性对照组及单独用药组， 差异有统计学意义（P0.05）。在检测蛋白表达过程中，我们发现培美曲塞能上调 p-AKT 的表达水平；吉非替尼联合培美曲塞处理组的 p-AKT 及 Bcl-2 较对照组明显 下降。 结论：本研究通过体外研究的方式，证明了培美曲塞与吉非替尼联用对 NSCLC 吉 非替尼获得性耐药 PC9/GR 细胞株具有较好的协同作用，可增强耐药细胞对吉非替 尼的敏感性，提示两药联合可能使 EGFR-TKI 获得性耐药的 NSCLC 患者获益。 关键词：非小细胞肺癌 吉非替尼 培美曲塞 细胞周期 凋亡 蛋白印迹 Combined Gefitinib and Pemetrexed Overcome EGFR-TKI-acquired Resistant in Non-small-cell Lung Cancer in Vitro Abstract Objective: Currently, chemotherapy and targeted-agents therapy share the principal limitation of the emerg