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- 2019-04-17 发布于贵州
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考点二 微生物的纯化培养技术? 1.原理:在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是纯化的细菌菌落。 2.微生物的接种方法: (1)平板划线法。 ①接种环的灼烧。 a.第一次划线前:杀死接种环上的微生物,避免污染培养物。 b.每次划线前:杀死残留菌种,保证每次划线菌种来自上次划线末端。 c.划线结束后:杀死残留菌种,避免污染环境和感染操作者。 ②灼烧接种环之后,要冷却后再进行操作,以免温度太高杀死菌种。 ③划线时最后一区域不要与第一区域相连。 ④划线用力要大小适当,不能用力过大将培养基划破。 (2)稀释涂布平板法。 ①稀释操作时,每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌;操作时,试管口和移液管应在离火焰1~2 cm处。 ②涂布平板时。 a.涂布器用体积分数为70%的酒精消毒,取出时,让多余酒精在烧杯中滴尽,然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。 b.不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中,以免引燃其中的酒精。 c.酒精灯与培养皿距离要合适,移液管管头不要接触任何物体。 【通关题组】 1.(微生物的接种方法)(2014·马鞍山模拟)下列在微生物的 实验室培养过程中,关于平板划线操作的叙述正确的是( ) A.使用已灭菌的接种环、培养皿,操作过程中不再灭菌 B.打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌,取出菌种后需马上塞 好棉塞 C.将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线即 可 D.最后应将平板倒置,放入培养箱中培养 【解题指南】解答本题的突破口: (1)明确平板划线法的操作过程。 (2)明确消毒、灭菌的对象。 【解析】选D。使用已灭菌的接种环、培养皿,操作过程仍要灭菌;打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌,取出菌种后含菌种的试管需要通过火焰灭菌后再塞好棉塞;将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线后盖上皿盖;最后应将平板倒置,放入培养箱中培养。 2.(无菌技术与接种方法)(2014·南京模拟)从自然菌样中筛 选较理想生产菌种的一般步骤是:采集菌样→选择培养→纯种 分离→性能测定。 (1)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是 从适合的环境采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化。培 养嗜盐菌的菌样应从 环境采集。 (2)选择培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境 条件,使其在群落中的数量大大增加,从而分离出所需微生物 的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的选择培养应选择___ _______的培养基,并在 条件下培养。 (3)下面两组图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后 培养的效果图解,请分析接种的具体方法。 获得图A效果的接种方法是 ,获得图B效果的接种方法 是 。 (4)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行 , 接种前要进行 ,在整个微生物的分离和培养中, 一定要注意在 条件下进行。 【解题指南】解题关键: (1)明确选择培养的含义及相应的措施。 (2)掌握两种接种方法在实验结果上的异同。 【解析】(1)嗜盐菌的菌样应从高盐环境中采集。(2)微生物产生淀粉酶,说明其碳源是淀粉,应选择以淀粉为唯一碳源的培养基,并在高温条件下培养。(3)图A菌落分布较均匀,接种方法是稀释涂布平板法,图B菌落集中呈线状,接种方法是平板划线法。(4)配制培养基时,各种成分在溶化后分装前,必须调整pH,接种前要进行高压蒸汽灭菌,实验中要注意在无菌条件下进行。 答案:(1)海滩等高盐 (2)以淀粉为唯一碳源 高温 (3)稀释涂布平板法 平板划线法 (4)调整pH 高压蒸汽灭菌 无菌 【资源平台】消毒与灭菌 培养基及相关容器 高压蒸汽 灭菌法 玻璃器皿、金属工具 干热灭菌法 接种工具 灼烧灭菌法 杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子) 强烈的 理化因素 灭菌 用酒精擦拭双手,用氯气消毒水源 化学药剂 消毒法 不耐高温的液体 巴氏消毒法 日常用品 煮沸消毒法 仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子) 较为温和的物理或化学方法 消毒 应用范围 常用方法 结 果 条 件 【思维拓展】 根据灭菌原理判断灭菌方法的适用范围 (1)灼烧灭菌是通过火焰灼烧物体表面达到灭菌目的,适用于“干燥物品的局部灭菌”。 (2)干热灭菌是通过干热灭菌箱的操作达到灭菌目的,适用于“干燥物品的整体灭菌”。 (3)高压蒸汽灭菌是通过高压蒸汽灭菌锅的操作达到灭菌目的,主要适用于“潮湿物品的整体灭菌”。 【典例】(2014·镇江模拟)细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽灭菌、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理,这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌 ( ) A.接种环、手、培养基 B.高压锅、手、接种
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